原位杂交技术的原理

原位杂交技术（in situ hybridization，ISH）是一门分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的新兴技术，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。(https://www.daowen.com)

根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可以分为DNA-DNA杂交、DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交。DNA原位杂交在病毒检测中应用广泛，如HPV病毒感染的检测。运用cDNA或寡核苷酸探针检测细胞和组织内RNA表达的原位杂交技术较检测DNA表达的原位杂交运用范围更为广泛。在医学形态学实验中涉及的冷冻组织切片、石蜡组织切片或细胞爬片均可以进行原位杂交。冷冻组织切片原位杂交所检测的DNA或RNA的阳性率高于石蜡切片，但组织形态保存较差。石蜡切片能够完好地保存组织细胞形态，但由于制片过程中使用了有机溶剂和高温处理，会影响DNA或RNA的检测阳性率，往往需要蛋白酶的消化才能取得阳性染色结果。