组织细胞培养的生存环境和条件
(一)无污染环境
无污染环境是保证细胞生存的首要条件。
(二)温度
36.5±0.5℃。培养细胞对低温的耐受力比对高温强。温度达43℃以上,1h内细胞都将死亡。
(三)气体环境和氢离子浓度
95%O2,5%CO2。CO2能维持培养基的pH值为7.2~7.4,细胞的耐酸性比耐碱性大一些,偏酸性环境更利于细胞生长。细胞在生长过程中随着细胞数量增多和代谢活动增强,会不断释放CO2,导致培养基呈酸性。
(四)体外培养所需基本物质
体外培养所需基本物质包括糖、氨基酸、促生长因子、各种元素及促细胞贴附物质等。
(五)渗透压
多数细胞渗透压为2600~3200sOm/kg。
(六)培养基
1.合成培养基(synthetic medium)
合成培养基主要来自动物体液或从组织中分离提取制备的成分,其营养性较高,但成分复杂,个体差异较大,在来源上有一定限制。
2.天然培养基(natural medium)
天然培养基是按人和动物体内细胞所需成分模拟合成的、配方恒定的一种较理想的培养基。(https://www.daowen.com)
3.无血清培养基(serum free medium)
无血清培养基成分包括基础培养液和附加成分。附加成分包括促贴壁附着成分、促生长增殖成分和蛋白酶抑制物等,这类培养基主要应用于研究细胞生长因子、单克隆抗体的制备以及细胞分泌产物等。
(七)附着底物
绝大多数培养细胞需附着在适宜的底物上才能生长。细胞贴附在底物上生长的性质称锚着依赖性。常见的附着底物有:
1.玻璃
如玻璃培养瓶、盖玻片等。
2.一次性塑料
如聚苯乙烯、聚四氟乙烯。可制成薄膜,建成小块后能置入各种平皿中,适于细胞贴附生长,便于取出、染色及观察。
3.微载体
微载体是由聚苯乙烯和聚丙烯酰胺制成的微小球体,附着面大,利于大量繁殖细胞。
4.饲细胞(feeder cell)
可用成纤维细胞或其他细胞长成单层后,大剂量射线照射,使细胞失去增殖能力但尚存活并有代谢活动,令其作为底物。再将其他细胞接种在这种单层细胞上,饲细胞的代谢产物利于其他细胞生长。饲细胞可用于特殊细胞培养。
(八)抑制细胞生长因素
有毒物质或微生物能抑制细胞生存和生长,因此需清除有毒物质,确保细胞培养的无污染环境。