培养物的污染及注意事项
凡是混入培养环境中对细胞生存产生危害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染物。因此，组织培养污染物应包括：生物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质（影响细胞生存、非细胞所需的化学成分）、细胞（非同种的其他细胞）。防止组织培养污染，预防是关键，预防措施应该贯穿整个细胞培养的始终。
（一）空气
空气是微生物及尘埃颗粒传播的主要途径。因此，培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行，工作时要戴口罩，以免因讲话、咳嗽等使外界污染进入操作面，造成污染。
（二）器材
各种培养器皿、器械消毒不彻底和洗刷不干净可导致污染，因此用于细胞培养的器皿应该严格消毒，器皿的运输、贮存过程要严格规范操作，谨防污染。另外，需要对培养箱进行定期消毒，防止形成污染。(https://www.daowen.com)
（三）操作
实验操作无菌观念不强，技术不熟练，使用污染的器皿或封瓶不严等，都可以造成污染。培养2种以上细胞时，操作不规范，交叉使用吸管或培养液、培养瓶等有可能导致细胞交叉污染。因此，在操作过程中，超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与风向相逆，不允许用手触及器皿的无菌部分，如瓶口和瓶塞内侧；在安装吸管帽、开启或封闭瓶口时要经过酒精灯烧灼，并在火焰附近操作；吸取培养液、细胞悬液等液体时，应专管专用，防止污染扩大或造成培养物的交叉污染；使用培养液前，不宜较早开启瓶口；开瓶后的培养瓶应保持斜位，避免直立；不再使用的培养液应立即封口；培养的细胞在处理之前不要过早地暴露于空气中；操作时不要交谈、咳嗽，以防唾沫和呼出的气流引发污染；操作完毕后应将工作台面整理好，并消毒、擦拭工作面，关闭超净台。
（四）其他
购入的未灭活血清应56℃水浴灭活30min，使血清的补体和支原体灭活；对新购入的细胞株应加强观察，防止外来的污染源；为了避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统的抗生素，或尽可能不用抗生素；及早冻存培养物；重要的细胞株传代工作应有2个人独立进行；定期消毒培养箱等。
（王 敏）