淋巴细胞功能测定
（一）T淋巴细胞功能测定
1.T细胞增殖试验
T细胞增殖试验是一种体外检测机体细胞免疫的试验方法。本试验分为T细胞特异性增殖和非特异性增殖2种方式，前者是用某种抗原如结核菌素刺激相应T细胞活化增殖的试验；后者是用T细胞丝裂原（PHA、ConA）或抗CD3单克隆抗体刺激多克隆T细胞活化增殖的试验。常用的淋巴细胞增殖检验方法简述如下。
（1）3H-TdR掺入法
在细胞增殖过程中，氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）可掺入细胞新合成的DNA中，且掺入量与细胞增殖水平成正比。取外周血单个核细胞与PHA共同培养，在终止培养前8～15h加入3H-TdR；在培养结束后收集细胞，用液体闪烁仪测定样品的放射活性可反映细胞增殖水平。该法灵敏可靠、应用广泛，但需要特殊仪器，且易发生放射性污染。
（2）MTT比色法
MTT是3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐的简称。在细胞增殖过程中，MTT 作为一种可溶性物质进入细胞后可被细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶还原形成褐色甲臜颗粒。研究证实：甲臜生成量与细胞增殖水平成正比；甲臜被盐酸异丙醇或二甲基亚砜溶解后使溶液呈现紫褐色；用酶标仪检测细胞培养液OD值可反映细胞的增殖水平。该法灵敏度不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。
2.迟发型超敏反应皮肤试验
迟发型超敏反应皮肤试验是一种简便易行的用于检测体内细胞免疫功能的试验方法。其原理是体内抗原致敏T细胞（效应T细胞）再次接受相同抗原刺激后，可通过释放Th1型细胞因子和细胞毒性介质诱导产生以单核细胞浸润为主的局部皮肤炎症反应。受试者局部炎症反应出现相对较晚，通常在抗原刺激后24～48h发生，72h达到高峰，故称迟发型超敏反应皮肤试验。阳性反应表现为局部皮肤红肿和硬结；反应强烈者可出现水肿，甚至局部组织坏死；细胞免疫低下者呈现弱阳性或阴性反应。本试验常用来检测胞内寄生菌（如结核杆菌、麻风杆菌等）感染、免疫缺陷病和肿瘤患者的细胞免疫功能；皮肤常用的生物性抗原有结核菌素、麻风菌素、念珠菌素、腮腺炎病毒等。
（二）B淋巴细胞功能测定
1.血清免疫球蛋白含量测定
B淋巴细胞接受抗原刺激后可增殖分化为浆细胞，合成、分泌特异性抗体（即免疫球蛋白）。检测血清免疫球蛋白水平可判断B淋巴细胞功能，常用ELISA、免疫比浊法等测定标本中IgG、IgM等各类Ig的含量。
2.抗体形成细胞（antibody forming cell，AFC）测定试验
抗体形成细胞测定试验又称溶血空斑试验（hemolytic plague assay），可用来检测产生抗体的B细胞数目。试验方法原理简述如下：
取绵羊红细胞（SRBC）免疫4d后的小鼠脾细胞（内含SRBC致敏B细胞，即AFC）与SRBC在凝胶介质中混匀；倾注平皿进行孵育，使AFC周围的SRBC被相应抗体致敏；在平皿表面加豚鼠新鲜补体进行二次孵育，使致敏SRBC因补体激活而发生溶解、在AFC周围出现肉眼可见的溶血空斑。
一个溶血空斑代表一个抗体形成细胞（浆细胞），通过计算溶血空斑数目即可得知B细胞增殖分化和产生抗体能力。
3.酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
试验方法原理简述如下：
（1）用已知抗原包被固相载体，加入相应抗原致敏的B细胞共同培养孵育；(https://www.daowen.com)
（2）当抗原致敏B细胞通过表面BCR接受相应抗原刺激后可分泌抗体，并与固相表面相应抗原特异性结合；
（3）加入酶标记第二抗体，通过底物显色后可在分泌相应抗体的B细胞所在处呈现有色斑点。
一个斑点代表一个抗体形成细胞（浆细胞），通过计数可得知B细胞增殖分化和产生抗体的能力。
（三）细胞毒试验
本试验是根据细胞毒性T细胞（CTL）和NK细胞可直接对某些靶细胞产生杀伤作用建立的，主要用于肿瘤免疫、移植排斥反应和病毒感染等方面的研究。
1.51Cr释放法
将Na2
51CrO4标记的靶细胞与待检效应细胞（CTL或NK）按一定比例混合培养一定时间后，若效应细胞能够杀伤靶细胞，则51Cr可以从裂解破坏的靶细胞内释放至液相。用γ计数仪测定培养上清中51Cr的放射活性，可反映效应细胞对靶细胞的杀伤作用。
2.乳酸脱氢酶释放法
将效应细胞与靶细胞按一定比例混合培养一定时间后，若效应细胞能够杀伤靶细胞，则乳酸脱氢酶（LDH）可因靶细胞裂解破坏而释放到培养液中。在上述培养液中加入相应底物显色后，用光度计测定上清液OD值可反映细胞对靶细胞的杀伤作用。
3.凋亡细胞检测法
效应细胞与靶细胞相互作用或FasL与靶细胞表面Fas结合后，可通过细胞凋亡途径使靶细胞损伤破坏。靶细胞凋亡检测方法简述如下：
（1）形态学检测法
镜下观测可见凋亡细胞体积缩小，细胞质浓缩；细胞核染色质密度增高，呈现浓染的半月状、斑块状或核着边现象；细胞膜内陷形成凋亡小体。
（2）琼脂糖电泳法
凋亡细胞DNA可被核酸酶在核小体单位之间随机切断，产生180～200bp（核小体单位长度及其倍数）的寡核苷酸片段。上述寡核苷酸片段在琼脂糖电泳中呈现阶梯状DNA区带图谱，借此可判定细胞凋亡。
（3）流式细胞术
①正常细胞的DNA为二倍体，细胞凋亡时DNA断裂为非二倍体或亚二倍体。流式细胞术检测显示，细胞凋亡时在正常细胞二倍体峰前可出现一个亚二倍体细胞凋亡峰，根据峰值大小可判断细胞凋亡程度。
②凋亡细胞膜受损可使其磷脂成分暴露，后者能与荧光标记的磷脂结合蛋白（annexin V）结合，采用流式细胞术检测分析可获得待检细胞中凋亡细胞的数目和频率。