1.7.1　293T细胞转染

1.7.1.1　细胞接种

将293T细胞接种于10cm盘中，加10ml完全培养基，密度为50%，在含有5%CO2的细胞培养箱中培养，如果是复苏的细胞，需要进行至少一次传代，才可以进行相关细胞试验。对数期生长的细胞，用10ml的PBS清洗，加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，在含有5%CO2的细胞培养箱中放置2min，使胰酶发挥作用。加入1ml完全培养基终止胰酶消化，轻轻吹打细胞，使得贴壁细胞全部脱离盘底，转移细胞至15ml离心管。加10mlPBS清洗盘底，并转移至15ml离心管，2000rpm×2min，弃上清液。加入10mlPBS，轻轻吹打，再次离心2000rpm×2min，弃上清液。加入10ml完全培养基，细胞计数后，每个六孔板的孔放入3×105个细胞，细胞不能太多，因为293T生长速度很快，但也不能太少，不然提取RNA或者蛋白时细胞长不满。最后，加入2ml完全培养基，培养于含有5%CO2的细胞培养箱中（37℃）。

1.7.1.2　细胞转染(https://www.daowen.com)

换液：弃培养基，2mlPBS清洗细胞两次，加入DMEM培养基（不能有血清和双抗，会影响转染效率）。取1.5mlEP管，加入100μlOPTI-MEM培养基，加入3μg质粒，轻轻混匀，室温放置5min。加入10μl Trans D2（Biolab，M2554S），轻轻混匀，室温放置25～30min。随后加入细胞培养液中（加入前及加入后不可以再吹打，只能轻轻摇匀），6～8h后，换成完全培养基，继续培养。转染体系如下表所示。