1.7.2　U251及U87细胞转染

使用invitrogen公司的Neon Transfect system进行转染，因为U87与U251转染困难，使用电转，可以提高转染效率。

将U251或者U87细胞接种于10cm盘内，加10ml完全培养基，密度为50%，培养在含有5%CO2的细胞培养箱中，如果是复苏的细胞，需要进行至少一次传代，才可以进行相关细胞试验。对数期生长的细胞，用10ml的PBS清洗，加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，在含5%CO2的细胞培养箱中放置5min（U251细胞与U87细胞贴壁较紧，需要较长时间），使胰酶充分发挥作用。加入1ml完全培养基终止胰酶消化，轻轻吹打细胞，使得贴壁细胞全部脱离盘底，转移细胞至15ml离心管。加10mlPBS清洗盘底，转移至15ml离心管，2000rpm×2min，弃上清液。加入10mlPBS，轻轻吹打，离心2000rpm×2min，弃上清液。细胞计数后，按照以下体系进行转染（本研究主要是6孔板）：(https://www.daowen.com)

将4×105细胞、3μg质粒与100μl Media R混匀，使用100μl的枪头进行电击转染，电击两次，电击完成后立即加入已经预热的DMEM完全培养基，放入细胞培养箱内培养。