1.14.4 实验步骤
(1)清除细胞培养基;
(2)以lx冰PBS洗涤细胞,吸去PBS;
(3)以200μl 1 xPLB加入6孔板每孔细胞中,将细胞裂解;
(4)室温下,将6孔板放在摇床上摇15min;将细胞裂解液移入1.5ml离心管中;(https://www.daowen.com)
(5)短瞬离心沉淀细胞碎片后,取20μl细胞裂解液放入96孔板(荧光报告系统专用),置于酶标仪中,设定程序检测;
(6)向96孔板中加入100μl lLARII,检测其中firefly荧光活性;
(7)随后仪器I占J4L板中加入100μl Stop&Glo Reagent,检测其中Renilla荧光活性;将firefly荧光活性和Renilla荧光活性值相比,得到比值即为检测结果。