1.15.1　Compound E浓度摸索

（1）Compound E介绍：Notch1信号通路中，γ-分泌酶将Notch1受体进行剪切，生成活性的NICD，NICD进入细胞核，调节相关基因表达；Compound E通过抑制γ-分泌酶活性，阻滞NICD生成，从而阻滞Notch1信号通路。

（2）对数期生长的U251细胞，0.25%胰酶消化，计数，使用PBS洗两遍。离心，铺六孔盘，细胞浓度为4×105/孔。

（3）经查找文献，DMSO在细胞内浓度不能超过1%，Compound E为DMSO所溶解，因此，所用DMSO浓度也不能超过1%，DMSO作为对照，工作液Compoud E浓度为1mmol/L，故所加Compound E最大浓度为100μm（此时DMSO浓度为1%）。(https://www.daowen.com)

（4）通过阅读试剂说明书及相关参考文献，推断Compound E最佳浓度在1μmol/L，故实验设计以1μmol/L为中心。实验分组为（单位为pm）：

细胞贴壁后12h给干预因素——DMSO或者Compound E，每过12h换液加干预因素一次，以保证药物浓度；加干预因素后6h、12h、24h、36h、48h、60h和72h收获细胞，提取RNA，荧光定量PCR检测Notch1信号通路靶基因HES1的mRNA表达量。