对数期生长的U251细胞,含0.25%EDTA的胰酶消化,计数,使用PBS洗2次,离心。siNotch1建议浓度为20~80nmol/L,故浓度摸索主要在这个范围内进行,实验分组:
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使用电转系统(详见2.2节)转染,转染后24h、36h、48h、60h和72h收获细胞,提取RNA,荧光定量PCR检测RND3、Notch1及Notch1信号通路靶基因HES1的mRNA表达量。