2.2.4　稳定细胞系的构建

为了研究RND3对GBM细胞增殖的作用，本课题组首先构建了高/低表达RND3的GBM稳定细胞系GFP-U251、GFP-RND3-U251、siCtrl-U251和siRND3-U251。免疫荧光结果显示，在波长为488的激发光刺激下，四个细胞系的细胞都能发出稳定均一的绿色荧光（因为四个质粒都带有绿色荧光蛋白），说明质粒转染入细胞后可以稳定的表达。随后，我们应用免疫印迹技术及荧光定量PCR检测了细胞内RND3的表达量，结果发现，与其对照组（GFP）相比，高表达组（GFP-RND3组）的增加了2倍（图2-12D），内源性RND3蛋白表达量明显改变，外源性RND3（GFP-RND3）表达明显增加，蛋白表达量增加了1倍（图2-12B）。低表达组稳定细胞（siRND3）与其对照组siCtrl相比，mRNA表达量降低了80%（图2-12D），蛋白表达量也明显降低（图2-12C）。(https://www.daowen.com)