2.3.3 调解Notch1信号通路可以调节GBM细胞增殖
我们已经证实，RND3可以调节GBM细胞的增殖，RND3可以调节GBM细胞内的Notch1信号通路，如果我们要确定RND3是否通过Notch1信号通路调解GBM细胞增殖，我们首先要确定Notch1信号通路与细胞增殖的关系。
（1）Notch1信号通路在GBM中高表达。
免疫印迹结果显示，在15例人脑GBM与15例正常脑组织中，Notch1信号通路的Notch1蛋白水平在人脑GBM内明显升高，与正常脑组织相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）（图2-21A）。免疫组织化学染色结果显示，与正常脑组织相比，Notch1在GBM内表达升高（图2-21A）。在15例人脑GBM与13例正常脑组织中，HES5的mRNA表达量在人脑GBM内明显升高，与正常脑组织相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）（图2-22C）。在15例人正常脑组织和15例人脑GBM组织内，HES5蛋白水平在人脑GBM内表达明显升高（图2-22A，B）。
（2）Notch1信号通路可以调节GBM细胞增殖。
免疫印迹结果显示，使用Flag-NICD激活Notch1信号通路后，Histone H3磷酸化水平明显增高（图2-23A）。细胞增殖曲线显示，细胞数明显增多，与对照组Flag组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-23B）。BrdU结果显示，BrdU阳性细胞比例增大，与对照组Flag组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-23C）。
免疫印迹结果提示，阻断Notch1信号通路后，Histone H3磷酸化水平明显降低（图2-24A）。细胞增殖曲线显示，阻断Notch1信号通路后，细胞增殖速度明显降低，与对照组DMSO组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-24B）。BrdU结果显示，阻断Notch1信号通路后，BrdU阳性细胞百分比明显降低，与对照组DMSO组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-24C）。
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图2-21 Notch1在人脑GBM及正常脑组织中的表达量
A：在15例正常脑组织和15例人脑GBM内NICD的表达量；B：RND3在正常脑组织和GBM内的表达量和表达位置。
免疫印迹结果显示，敲低Notch1，HistoneH3磷酸化水平明显降低。细胞增殖曲线显示，敲低Notch1，细胞增殖速度明显降低，与对照组siCtrl组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-24B）；BrdU结果显示，敲低Notch1，BrdU阳性细胞百分比明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）（图2-24C）。
图2-22 HES5在人脑GBM及正常脑组织中的表达量
A，B：在15例正常脑组织和15例人脑GBM内HES5的蛋白表达量；C：在13例正常脑组织和15例人脑GBM内HES5的mRNA表达量。