2.3.2 RND3在GBM内可以调节Notch1信号通路
为了探讨RND3是否可以调节Notch1信号通路，我们通过多种方法、多个细胞系进行研究。
（1）在U251细胞中，RND3可以负性调节Notch1信号通路。
在GBM细胞U251中，高表达RND3（GFP-RND3），HES1的mRNA表达量降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＝0.0077＜0.05）（图2-17A左）。低表达RND3（siRND3），HES1的mRNA表达量升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＝0.0016＜0.05）（图2-17A右）。与对照组（GFP）相比，高表达RND3（GFP-RND3），HES1的蛋白表达量降低（图2-17C左）。与对照组（siCtrl）相比，低表达RND3（siRND3），HES1蛋白表达量明显升高（图2-17C右）。高表达RND3（GFP-RND3），荧光素酶活性降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＝0.0001＜0.05）（图2-17B左）。低表达RND3（siRND3），荧光素酶活性升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＝0.0002＜0.05）（图2-17B右）。高表达RND3（GFP-RND3）后，HEY1表达量明显降低，与对照组相比（siCtrl），差异具有统计学意义（P＝0.0041＜0.05）（图2-18）。
图2-17 RND3在GBM细胞系U251内可以负性调节Notch1信号通路
A：HES1在低/高表达RND3时的mRNA表达量；B：Notch1活性形式NICD与HES1启动子结合位点在高/低表达RND3时的数量；C：HES1在高/低表达RND3时的蛋白表达量；D：RND3与Notch1靶基因HES5在人脑组织中的相关性，圆点为脑组织，三角为GBM组织。
（2）在GBM细胞U87中，RND3可以负性调节Notch1信号通路。
在GBM细胞U87中，高表达RND3（GFP-RND3），HES1的mRNA表达量降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＜0.0001）（图2-19A左）。低表达RND3（siRND3），HES1的mRNA表达量升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＜0.005）（图2-19A右）。高表达RND3（GFP-RND3），荧光素酶活性降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＜0.005）（图2-20A左）。低表达RND3（siRND3），荧光素酶活性升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＜0.0001）（图2-20A右）。
图2-18 Notch1信号通路靶基因HES5、HEY1和HEY2在RND3高表达时的表达量(https://www.daowen.com)
图2-19 在U87和293T细胞中高/低表达RND3时HES1的mRNA表达量
A：在U87细胞中，Notch1信号通路靶基因HES1在高/低表达RND3时的mRNA表达量；B：在293T细胞中，Notch1信号通路靶基因HES1在高/低表达RND3时的mRNA表达量。
（3）在非肿瘤细胞293T中，RND3可以负性调节Notch1信号通路。
在293T细胞中，高表达RND3（GFP-RND3），HES1的mRNA表达量降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＜0.005）（图2-19B左）。低表达RND3（siRND3），HES1的mRNA表达量升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＜0.0001）（图2-19B右）。高表达RND3（GFP-RND3），荧光素酶活性降低，与对照组（GFP）相比，差异具有统计学意义（P＜0.0001）（图2-20B左）。低表达RND3（siRND3），荧光素酶活性升高，与对照组（siCtrl）相比，差异具有统计学意义（P＜0.005）（图2-20B右）。
在16例GBM与正常脑组织中，RND3和HES5的mRNA表达水平呈负相关（R＝-0.8430），具有统计学意义（P＝0.0002＜0.05）（图2-15D）。
图2-20 在U87细胞和293T细胞中过高/过低表达RND3时荧光素酶活性
A：在U87细胞中，RND3高/低表达时的荧光素酶活性；B：在293T细胞中，RND3高/低表达时的荧光素酶活性。