2.3.4 RND3通过Notch1信号通路调解细胞增殖
本研究已经证实，RND3可以抑制GBM细胞增殖，RND3可以抑制Notch1信号通路，抑制Notch1信号通路可以抑制GBM细胞增殖，但RND3是否通过抑制Notch1信号通路依然未知。为此，本研究通过两个方面进行研究：
（1）Flag-NICD可以逆转RND3的作用。
细胞计数结果显示，高表达RND3后，细胞数明显减少，与对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.001）（图2-25A）。使用Flag-NICD转染入高RND3细胞，与GFP-RND3组相比，细胞数增加，但与GFP组相比，细胞数差异无统计学意义（P＝0.292＞0.05）。
图2-23 激活Notch1信号通路后细胞的增殖能力
A：高表达NICD后，Histone H3磷酸化水平；B：高表达NICD后，细胞增殖曲线；C：高表达NICD后，BrdU阳性细胞及其百分比。
BrdU结果显示，高表达RND3后，BrdU阳性细胞比例降低，与对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）（图2-25B）。使用Flag-NICD转染入高RND3细胞，与GFP-RND3组相比，细胞数增加，但与GFP组相比，细胞数差异无统计学意义（P＝0.314＞0.05）。
（2）阻断Notch1信号通路，siRND3对细胞增殖的作用降低。
在U251细胞中，敲低RND3，细胞增殖增加，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。在阻断Notch1信号（Compound E或siNotch1）的U251细胞中，敲低RND3，细胞增殖无明显改变，与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）（图2-26A，B）。(https://www.daowen.com)
图2-24 抑制Notch1信号通路对U251细胞增殖能力的影响
A：抑制Notch1信号通路后GBM细胞中的HistoneH3的磷酸化水平；B：抑制Notch1信号通路后GBM细胞增殖曲线；C：抑制Notch1信号通路后BrdU阳性细胞及其百分比。
图2-25 同时高表达RND3和激活Notch1信号通路对细胞增殖的影响
A：同时高表达RND3和激活Notch1信号通路后，细胞增殖曲线；B：同时高表达RND3和激活Notch1信号通路后，BrdU阳性细胞百分比。
图2-26 阻断Notch1信号通路后，敲低RND3对细胞增殖的影响
A：使用Compoun E或/和siRND3，各组细胞数；B：使用siNotch1或/和siRND3，各组细胞数。