常用免疫学检测技术

三、常用免疫学检测 技术

(一)抗原抗体检测

在一定的条件下,抗原和相应的抗体在体外结合出现肉眼可见的凝集、沉淀、补体结合等多种反应,通过对这些反应结果的分析,可鉴定抗原或抗体。抗体主要存在于血清中,临床上多用血清标本进行试验,故体外的抗原抗体反应被称为血清学反应。

1.抗原抗体反应的特点

(1)特异性:一种抗原只与其相应的抗体发生特异性结合。抗原决定簇与抗体分子超变区互补的空间结构决定了抗原抗体结合的专一性,使其可用已知抗原(抗体)来检测未知的抗体(抗原)。但许多抗原分子携有多种抗原决定簇,当两种不同抗原携有相同或相似抗原决定簇时,能发生交叉反应。

(2)比例性:抗原与抗体的结合反应是否肉眼可见,两者的比例是关键因素。如果比例适当,可形成肉眼可见的数量多且体积大的沉淀复合物。若比例不当,虽已发生结合,但复合物体积小,肉眼不可见。

(3)可逆性:抗原抗体的结合只存在于分子表面,并未破坏它们各自的结构和生物活性,一定条件下还可解离,解离后保持着原有理化特征与生物活性。(https://www.daowen.com)

2.常见的抗原抗体检测方法

(1)凝集反应:细菌、细胞等颗粒性抗原与其相应抗体直接结合后呈现肉眼可见的凝集现象。常用于细菌分型和鉴定红细胞ABO血型。试验时,将待检抗原和已知的相应抗体同时置于玻片上进行反应,若几分钟后出现凝集现象,则结果为阳性,说明存在检测抗原。反应可分为直接凝集和间接凝集。

(2)沉淀反应:在适当条件下,可溶性抗原与其相应抗体结合而呈现沉淀现象的反应。

(3)免疫电泳:电泳分析技术与沉淀反应的结合,具有速度快、敏感性高的特点,常用于定性分析,鉴定抗原、抗体纯度和分析血清蛋白组分等。常用免疫电泳、对流免疫电泳等。

(4)免疫标记技术:采用微量即可测定的标记物,标记抗原或抗体,通过检测标记物来测定抗原抗体复合物的检测技术,常用的有以下两种。

①酶联免疫吸附试验(ELISA):酶免疫技术应用最广的一种方法。该方法是将抗原或抗体包被于固相载体表面,通过抗原抗体特异性结合并利用酶促底物显色的反应来判断。常用酶为辣根过氧化物酶(HRP),底物为邻苯二胺(OPD)和四甲基联苯胺(TMB)。有多种方法类型:测定大分子蛋白抗原常用双抗体夹心法;测定单个抗原决定簇的小分子抗原常用竞争抑制法;测定抗体常用双抗原夹心法、间接法、捕获法、竞争法。可定性或定量检测抗原或抗体,广泛用于传染病诊断,激素、补体、药物等检测,原理如图13-9所示。

图示

图13-9 EIASA双抗体夹心法原理

②化学发光免疫技术:一种结合发光技术和免疫反应的新型免疫标记技术。该方法兼具高灵敏性与高特异性的优点,广泛用于检测各种微量抗原或抗体,如激素、肿瘤标志物、药物浓度等。

(二)免疫细胞及其功能检测

外周免疫器官和外周血中存在不同类型的免疫细胞,检测这些免疫细胞的数量、功能、状态,对了解机体免疫功能状态及疾病诊断、预后检测具有重要意义。

1.T细胞的检测

(1)T细胞增殖试验:淋巴细胞母细胞转化试验,T细胞受到抗原或有丝分裂原——植物血凝素(PHA)刺激后,表现出一系列增殖反应。常用检测方法包括形态学检查法、MTT比色法等。通过计算转化率,间接判断机体的细胞免疫功能。

(2)迟发型超敏反应检测:当机体已建立对某种抗原的细胞免疫,再用相同抗原注入皮内时,细胞免疫正常者会表现出以局部红肿、硬结为特征的迟发型超敏反应,而细胞免疫低下者为阴性结果。如结核菌素试验(PPD),可判断受试者对结核分枝杆菌的免疫力。

2.B细胞检测

(1)抗体的检测:可通过单向琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、速率比浊法等测定待测标本中各类免疫球蛋白。

(2)B细胞数量:应用抗B细胞特异性表面标志的抗体,借助免疫荧光法可检测B细胞总数与亚群,主要用于判断原发性或继发性免疫缺陷患者的体液免疫功能。

(3)B细胞功能:原理与T细胞增殖试验相同,但刺激物不同,B细胞用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等作为刺激物。

点滴积累

(1)人工主动免疫是指给机体接种疫苗等抗原物质,刺激机体产生特异性免疫应答,以获得免疫力的方法,也称预防接种。人工被动免疫是给机体输入抗体制剂,使机体被动获得特异性免疫力。

(2)免疫治疗是利用免疫学原理,针对疾病的发生机制,人为地调整机体的免疫功能,达到治疗目的所采取的措施。常见的免疫治疗方法有治疗性疫苗、抗体、细胞因子、过继免疫治疗和造血干细胞移植等。

(3)抗原抗体检测是指在一定的条件下,抗原和相应的抗体在体外结合出现肉眼可见的凝集、沉淀、补体结合等多种反应,通过对这些反应结果的分析,可鉴定抗原或抗体。免疫细胞功能检测对了解机体免疫功能状态及对免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断、预后检测具有重要意义。