实验十一　乙型肝炎病毒表面抗原检测实验

实验十一　乙型肝炎病毒表面抗原检测实验

【实验目的】

（1）掌握ELISA法（双抗体夹心法）的原理。

（2）熟悉乙型肝炎病毒表面抗原检测操作方法及结果判定。

【实验时间】

2学时。

【实验内容】

乙型肝炎病毒表面抗原检测实验。

1.实验原理

采用ELISA双抗体夹心法检测人血清或血浆中的HBsAg。采用HBsAb包被反应板，加入待测标本，同时加入酶标抗体，进行孵育：当标本中存在HBsAg时，该成分与包被的HBsAb及酶标抗体形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗去反应物，加入显色剂后，将有明显的颜色变化；当标本中没有HBsAg时，加入底物后没有或只有很轻微颜色变化。

2.实验材料

（1）试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒。

（酶标抗体、HBsAg阳性对照、HBsAg阴性对照、底物A、底物B、终止液）

（2）待测血清样本。

（3）洗涤液、微孔板（已包被HBsAb）。

（4）移液枪、枪头、一次性手套、试管、记号笔等。

（5）37 ℃恒温箱。

3.实验对象　人。

【实验步骤】

（1）平衡试剂盒：试剂盒置于室温进行平衡至18～25 ℃。

（2）编号：设阳性孔、阴性孔各1个，待测样品孔2个。用记号笔进行标记。

（3）加样品：阳性孔、阴性孔分别加入阳性对照、阴性对照50 μL，待测样品孔加入待测血清样本50 μL，然后每孔加入酶标抗体1滴。

（4）温育：置于37 ℃恒温箱孵育30 min。(https://www.daowen.com)

（5）洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持30～60 s的浸泡时间）。

（6）显色：每孔加入底物A、底物B各1滴，轻拍混匀，37 ℃孵育10～15 min。

（7）终止：每孔加入终止液1滴，混匀。

（8）观察颜色变化。

【实验提示】

（1）包被缓冲液、洗涤液、标本稀释液等可提前配制，于冰箱中短期保存，使用前观察是否变质。

（2）加样应加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，避免产生气泡；一个人操作时，一次操作不宜多于两块板。

（3）洗涤必须彻底，防止产生假阳性。

（4）温育常采用的温度有43 ℃、37 ℃、室温和4 ℃等。37 ℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。

【实验思考】

ELISA操作中重要的关键步骤是什么？

目标检测

简答题

1.简述三类微生物的典型代表。

2.简述抗原的基本特性。

3.抗体的Fc段与哪些生物学作用相联系？

4.简述免疫应答的基本过程。

5.列表比较人工主动免疫和人工被动免疫。