T4多聚核苷酸激酶

T4多聚核苷酸激酶具有两种活性，正向反应活性的效率高，可催化ATP的γ磷酸转移至DNA或RNA的5′-OH，用来标记或磷酸化核酸分子的5′端；逆向反应是交换反应，活性很低，催化5′-磷酸的交换，在过量ADP存在下，T4多核苷酸激酶催化DNA的5′-磷酸转移给ADP，然后DNA从γ-32p ATP中获得放射性标记的γ-磷酸而被重新磷酸化。

T4多聚核苷酸激酶在基因工程中的作用有：①使DNA或RNA的5′-OH磷酸化，保证随后进行的连接反应正常进行；②利用其催化ATP上的γ磷酸转移至DNA或RNA的5′-OH上用作Southern、Northern、EMSA等实验的探针、凝胶电泳的标记、DNA测序引物、PCR引物等；③催化3′磷酸化的单核苷酸进行5′-OH的磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3′末端连接。需要指出的是，PEG可促进磷酸化反应速率和效率；铵盐沉淀获得的DNA片段不适用于T4多聚核苷酸激酶的标记反应，这是因为铵盐强烈抑制该酶的活性。