一、连接方式
根据两个连接片段的末端性质,可以将连接分成黏性末端连接和平末端连接两种方式。黏性末端连接即进行连接反应的两个DNA末端为互补的黏性末端,这种连接效率高,是常用的连接方法;平末端连接即进行连接的两个DNA末端为平末端,这种连接方式效率低,酶用量大。
DNA重组技术中所指的连接是指利用DNA连接酶将不同的DNA片段连接成一个新的DNA分子(重组子),通常是把目的基因与载体连接成重组子,然后导入大肠杆菌进行增殖或者表达。为了使目的基因与载体连接成重组子,需要对目的基因片段和载体的末端进行处理,然后再进行连接反应。目的基因片段和载体的连接方式主要有黏性末端连接、平末端连接、同聚物加尾连接和人工黏性末端连接等方法,虽然它们在对载体和片段的处理方式上有所不同,但利用的都是DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。