重组子的筛选方法
2025年09月26日
第四节 重组子的筛选方法
将转化后的预培养物涂布到含有质粒载体选择标记对应的抗生素的平板上,这样在平板上形成的菌落都含有一定质粒载体DNA,这种菌落就称为转化子。虽然转化子都是含有载体DNA分子的,但是它们有些含有的不是重组的载体DNA分子,而是没有外源DNA的自身载体DNA分子,所以转化之后,还得利用一定的方法将连接上外源片段的转化子挑选出来,通常就把含有外源DNA重组载体的转化子称为重组子。在基因文库中,不是所有的重组子都含有所需要的目的DNA片段,经过一定的筛选方法,从大量的重组子筛选得到含有目的DNA序列的重组子,这个重组子就称为阳性克隆子或者期望重组子。
基因工程实验中筛选通常包括重组子和阳性克隆子的筛选。λ噬菌体载体或柯斯质粒载体采用转导的方式进行转化,由于没有插入外源的载体是不能被包装成有活力的颗粒的,所以它们的转化子具有很高的重组率,这两类载体多用于文库的构建,而这类文库的筛选也就是阳性克隆子的筛选。对于质粒载体来说,转化子包含无插入片段的非重组子和有插入片段的重组子,因此对其来说,筛选就是重组子的筛选。