1.3　虫草素测定

虫草素的测定采用高效液相色谱法(张红霞等2005)。

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Shim-pack vp-ODS(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：V(水)∶V(甲醇)=85∶15，流速0.8mL/min，检测波长260nm，进样量10μL，温度35℃。(https://www.daowen.com)

1.3.2 虫草素测定

待液体发酵培养至第13天，在摇床上取出培养物，经抽滤后定容到100mL，对每个样品进行取样待测。抽滤后的菌丝体置于烘箱中干燥，烘干后，称量菌丝体的总重量。菌丝体加液氮研磨成粉末，称取0.1g加入2mL纯净水，超声波100W、60℃处理50min，4000r/min离心10min，取上清液，重复提取3次，合并上清液待测。菌丝体提取液和发酵液直接过0.45μm滤膜后，采用高效液相色谱检测虫草素含量。