1.2　方法

1.2　方法

1.2.1 裸仁南瓜籽油质量检测

(1)水分及挥发物的测定：直接干燥法，按GB 5009.236—2016进行，重复测定3次。

(2)酸价的测定：冷溶剂指示剂滴定法，按GB 5009.229—2016进行，重复测定3次。

(3)过氧化值的测定：滴定法，按GB 5009.227—2016进行，重复测定3次。

1.2.2脂肪酸组成分析

准确称取裸仁南瓜籽油50.0mg于试管中，加入体积比为1∶1的石油醚-苯混合溶剂2mL溶解，加入0.4mol/L的KOH-甲醇溶液2mL，混匀后于室温放置30min，加2mL蒸馏水混匀，5000r/min离心10min，取上清液待测。采用峰面积归一法得出各脂肪酸的相对含量，各色谱峰相应的质谱图检索采用NIST标准普库进行。葡萄籽油和亚麻籽油作相同处理。

(1)GC条件：选用SH-RXi-5Sil MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管色谱柱；升温程序为起始温度70℃，保持3min，以10℃/min升温至180℃，再以2℃/min升温至200℃，保持1min，最后以3℃/min升温至220℃，保持15min；进样口温度250℃，载气为高纯氦气，分流比50∶1，柱流量1mL/min，进样量1μL，溶剂延迟3min。

(2)MS条件：电离方式为EI，电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃，质量扫描范围是40～550u，全扫描方式。

1.2.3 植物甾醇组成分析

取3.00g裸仁南瓜籽油，加入1.5mol/L的KOH-乙醇溶液30mL，于80℃水浴回流，进行皂化反应2h。皂化完成，趁热加入5mL的蒸馏水，以皂化液和正己烷体积比为1∶1萃取2次，皂化液和正己烷体积比为2∶1萃取1次，合并萃取液，经蒸馏水，20% KOH溶液，20%乙醇溶液，蒸馏水依次洗涤，至流出液为中性。合并上层正己烷层，加适量无水硫酸钠除水，旋转蒸发浓缩得干的不皂化物。取适量不皂化物，加200μL BSTFA+TMCS(99∶1)试剂在80℃下衍生40min，冷却，加入0.5mL CH2 Cl2，得衍生化样品，待测。采用峰面积归一法得出各植物甾醇的相对含量，各色谱峰相应的质谱图检索采用NIST标准普库进行。葡萄籽油和亚麻籽油作相同处理。

(1)GC条件：选用SH-RXi-5Sil MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管色谱柱；升温程序为初始温度150℃，保持3min，以15℃/min升至290℃，保留20min；进样口温度280℃，载气为高纯氦气，分流比50∶1，柱流量1mL/min，进样量1μL，溶剂延迟3min。(https://www.daowen.com)

(2)MS条件：EI离子源，电子能量70eV，离子源的温度为230℃，接口温度为280℃，质量扫描范围是40～550u，全扫描方式。

1.2.4 角鲨烯含量测定

(1)供试样品溶液制备：取1.2.3所得的不皂化物，加甲醇溶解，定容至10m L。得供试样品。所制得的供试样品按照1.2.4(3)色谱检测条件进样，计算裸仁南瓜籽油角鲨烯含量，试验设置3组平行。葡萄籽油和亚麻籽油作相同处理。

(2)角鲨烯的标准曲线：准确称取角鲨烯标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，获得浓度为2mg/mL的母液。分别取0.15m L，0.30mL，0.45m L，0.60m L，0.75mL于10mL容量瓶，溶解定容，制成0.30mg/mL，0.60mg/mL，0.90mg/mL，1.20mg/mL，1.50mg/mL的标准溶液，按照1.2.4(3)色谱检测条件进样5μL，以角鲨烯浓度为横坐标，峰面积为纵坐标制作标准曲线。

(3)高效液相色谱条件：Agilent-ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇，等度洗脱；柱温30℃，流速0.8mL/min，进样10μL，检测波长210nm。

1.2.5 抗氧化活性研究

(1)清除DPPH自由基能力的测定：参考文献［16- 17］的方法，研究裸仁南瓜籽油清除DPPH自由基的能力。葡萄籽油和亚麻籽油作相同处理。

(2)清除ABTS自由基能力的测定：参考文献［18］的方法，研究裸仁南瓜籽油清除ABTS自由基的能力。葡萄籽油和亚麻籽油作相同处理。

(3)抗氧化能力评价指标的计算方法：以油样浓度为横坐标，抗氧化能力为纵坐标，研究其相关性及变化趋势，求得计算公式。50%清除率对应的浓度值为油样自由基清除能力的IC50值，R为相关系数，表示相关性(R值越接近1，相关性越好)。

1.2.6 数据处理

数据通过Excel 2013处理，作图利用OriginPro 8.6进行。