高速逆流色谱法分离制备蛹虫草发酵液中虫草素

胡瑕1，2 　谢红旗1，3 　罗巍1，2 　夏志兰1，2 　刘东波1，2*

(1.湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128；2.国家中医药管理局亚健康干预技术实验室，湖南 长沙 410128；3.湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室，湖南 长沙 410128)

摘要：目的 以蛹虫草发酵液虫草素粗提物为原料，对高速逆流色谱(HSCCC)分离制备虫草素条件进行研究。方法 利用HPLC测定分配系数法结合分析型HSCCC对分离虫草素的溶剂体系进行筛选，确定虫草素分离的最佳溶剂体系为醋酸乙酯-正丁醇-0.5%氨水(2∶3∶5)，并运用此溶剂体系，上相作为固定相，下相作为流动相，利用制备型HSCCC分离制备蛹虫草发酵液中虫草素。结果400mg虫草素粗产品通过制备型HSCCC一次分离制备获得质量分数为98.7%的虫草素产品43.8mg。结论 该法效率高，操作简单，为虫草素的大量制备提供了重要参考。(https://www.daowen.com)

关键词：虫草素；高速逆流色谱；蛹虫草；分配系数；物质基础

蛹虫草Cordycepsmilitaris(Fr.)Link，又名北冬虫夏草、北虫草，属子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草属［1］，与冬虫夏草同属，是我国传统的名贵中药之一。虫草素(3＇-脱氧腺苷)是蛹虫草的主要活性成分之一，蛹虫草野生和人工培育子实体，发酵培养的菌丝体及发酵液中均含有虫草素［2- 4］。虫草素具有抗菌、抗HIV-Ⅰ型病毒、抑制肿瘤，提高机体免疫力等药理活性［5- 6］。目前，虫草素的生产量已经不能满足市场需求，尤其是高纯度虫草素的大量制备技术的缺乏一定程度上限制了其药理药效的进一步研究和临床应用。

高速逆流色谱(high speed counter-current chro-matography，HSCCC)是一种新型的液-液分配色谱技术，它在天然产物分离中具有独特的优势，不但分离效率高而且制备量大，同时较传统的色谱技术，消除了固态载体导致的样品不可逆吸附、对样品的污染、变性、失活等影响［7 9］。目前，虫草素的分离主要采用离子交换树脂柱、活性炭色谱柱、硅胶色谱柱等方法［10 11］，但均存在回收率低、操作步骤繁琐、难以获得高纯度产品的缺陷。本研究将HSCCC技术应用于虫草素的分离制备，旨在获得纯度高的虫草素。