炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)
炭疽芽孢杆菌习惯上称炭疽杆菌,在兽医学和医学上均占有相当重要的地位,是引起人类、各种家畜和野生动物炭疽(anthrax)的病原,几乎所有的哺乳动物均能感染,少数鸟类也易感,其中草食动物尤为易感。炭疽是OIE 规定的必须通报的疫病,也是我国规定的一类动物疫病。
1.形态染色
炭疽杆菌为革兰阳性,直杆状大杆菌,大小(1.0~1.2)µm×(3.0~5.0)µm,圆端或方端;无鞭毛,不运动。芽孢椭圆形,小于菌体,位于中央。可形成荚膜。DNA(G+C)=32.2~33mol%。在动物组织和血液中,菌体单在或呈短链状,菌体接触面膨大呈竹节状,荚膜较厚。在牛、绵羊体内形成的荚膜最明显,马、骡次之,猪体内一般轮廓不清。荚膜抗腐能力强,菌体腐败消失后可见菌蜕(菌影)。体外培养时不能形成荚膜;在含有血液的培养基,经37℃、10%~20% CO2(模拟体内环境)培养时可形成荚膜。该菌接触空气中的游离氧后方可形成芽孢,体外培养菌呈长链状,并产生芽孢。7~8h 后形成芽孢,30℃下发芽仅需8min,不同温度下产生的芽孢成分不同。炭疽芽孢杆菌镜检详见图4-3-1。
图4-3-1 芽孢杆菌革兰染色镜检形态
2.培养特性
该菌最佳生长温度为30~37℃,最佳生长pH为7.2~7.6,需氧。对营养要求不高。在普通琼脂平板上,强毒菌株形成菌落R 型(图4-3-2),呈灰白色、表面干燥、边缘卷发状如火焰状、有小尾突起,接种环挑取时有“拉丝”现象。弱毒菌株菌落为稍小的S型。在绵羊血平板上不溶血。普通肉汤37℃培养24h,上层液透明,形成白色絮状沉淀。明胶穿刺呈现倒立松树的形状,培养2~3天后,明胶表面液化呈漏斗状。使用青霉素含量0.5IU/ml 的液体培养产生“串珠反应”,原因是幼龄炭疽杆菌细胞壁的肽聚糖合成受抑制而形成原生质体,并相互连接形成串珠样。
图4-3-2 芽孢杆菌的R 型菌落
3.生化反应
发酵葡萄糖产酸、不产气。可水解淀粉、明胶和酪蛋白。V-P试验阳性,能还原硝酸盐。牛乳经2~4 天凝固,然后缓慢胨化。卵磷脂酶阳性或弱反应。触酶阳性。
4.鉴别要点
炭疽病畜的尸体严禁剖检,血样可从耳根部采集,必要时切开肋骨取脾脏进行实验室检验。皮肤炭疽可采集病灶的水肿液或渗出物,肠炭疽可采集粪便样品。若病畜尸体已被误剖,则可采集脾、肝等样品进行实验室检验。病料涂片后,采取碱性亚甲蓝染色法、瑞氏染色法或姫姆萨染色法进行染色后再镜检,若发现视野中有带荚膜、竹节状的大杆菌,即可做出初步判断。材料不新鲜时菌体易消失。可用血琼脂平板或普通营养琼脂平板进行细菌分离培养。37℃培养16~20h 后,挑取纯培养物与其他芽孢杆菌进行鉴别,详见表4-3-1。
表4-3-1 炭疽杆菌与其他需氧芽孢杆菌的鉴别