产气荚膜梭菌（C.perfringens）

产气荚膜梭菌（C.perfringens）

该菌旧名魏氏梭菌（C.welchii）在自然界分布极为广泛，在一定条件下可导致机体组织严重气肿，产生坏死、水肿、产气等多种症状。传统上依据主要致死性毒素可将此菌分为A、B、C、D 和E 5 个型。

1.形态染色

革兰阳性粗大杆菌，两端钝圆，大小（0.6～2.4）µm×（0.3～19.0）µm，单在或成双，无鞭毛。一般不产生芽孢，但在无糖培养基上菌体膨胀，在菌体中央或近端呈现较大的卵圆形芽孢。在动物体内或含血清培养基内可形成荚膜。

2.培养特性

该菌不严格厌氧，在普通培养基上即可生长，在5%～10% CO2的固体培养基上生长稀疏。A、D 和E 型最适生长温度为45℃，B、C 型为37～45℃。在血平板上，形成直径2～5mm 的菌落，表面光滑、隆起、边缘整齐、圆形、灰白色菌落。多数菌株在血平板上产生双溶血环，内环完全溶血（θ 毒素），外环不完全溶血（α 毒素）；部分B、C 型菌株可在绵羊或牛血平板上产生较宽溶血环（δ 毒素）。在乳糖牛奶卵黄琼脂平板上的菌落周围有乳白色混浊圈，为卵磷脂酶分解卵黄中的卵磷脂所致，这一现象称为纳格勒反应（Nagler’s reaction）。在胰䏡-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）培养基上为黑色菌落。在庖肉培养基中产生大量气体，肉渣不被消化，呈淡粉红色。在含铁牛奶培养基中培养8～10h 后，分解乳糖产酸，使其中酪蛋白凝固；产生大量气体（H2和CO2），使乳凝块破裂成多孔海绵状，严重时被冲成数段，甚至喷出管外，呈“暴烈发酵”现象，培养基不变黑（图4-4-1）。

3.生化反应

产气荚膜梭菌氧化酶阴性，能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖，并产酸产气。不发酵甘露醇和水杨苷。吲哚反应阴性，能液化明胶，产生H2S，不能消化已凝固的蛋白质和血清。无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐（表4-4-1）。(https://www.daowen.com)

4.分离鉴定

（1）分离鉴定流程：分离培养时，要注意观察该菌为革兰阳性粗大杆菌。取坏死组织或肠内容物直接涂片染色，镜检可见革兰阳性粗大杆菌，有的有荚膜。分离培养用0.1%的蛋白胨水制成悬液，接种血平板、牛奶培养基或庖肉培养基厌氧培养，观察生长情况，并取培养物涂片镜检。根据其培养特性，如厌氧、生长速度快、不运动、菌落形态、双层溶血环和牛奶暴烈发酵等特点作出鉴别，分离鉴定流程见图4-4-2。乳糖—明胶、牛奶发酵和动力—硝酸盐这3 项试验具体操作步骤可参考《食品微生物检验 产气荚膜梭菌检验》（GB 4789.13—2012）。

（2）与破伤风梭菌的鉴别：产气荚膜梭菌发酵糖，在庖肉培养基中肉渣不消化，产生大量气体；破伤风梭菌不发酵糖，在庖肉培养基中肉渣部分消化，微变黑，产生少量气体。

（3）肠内容物毒素检测：取肠内容物离心后取上清液，分成两份，一份60℃处理30min，一份不加热，分别静脉注射家兔（1～3ml）或小鼠（0.1～0.3ml）。如有毒素存在，不加热组动物数分钟至数小时内死亡，动物躯体膨胀，取肝或腹腔渗出液涂片镜检并分离培养；加热组不出现死亡。