鸭疫里氏杆菌（R.anatipestifer）

鸭疫里氏杆菌（R.anatipestifer）

鸭疫里氏杆菌主要引起鸭传染性浆膜炎，为主要侵害雏鸭的一种细菌性传染病。我国在20 世纪80 年代早期发现，引起小鸭大批死亡和发育迟缓，主要表现为纤维素性心包炎、气囊炎、肝周炎以及脑膜炎。

1.形态染色

革兰阴性，菌体呈短杆状或椭圆形，大小（0.3～0.5）µm×（0.7～6.5）µm，单个、成双存在或短链排列，偶见个别长丝状，可形成荚膜，无鞭毛和芽孢，瑞氏染色可见两极着色［图6-5-1（a）］。

2.培养特性

本菌要求营养丰富，普通培养基上不生长。初次分离培养需接种在巧克力平板、TSA 或Columbia 血平板（含V 因子）等培养基上。在烛缸或5%～10%的CO2培养箱中，37℃培养24～48h。在血平板上为圆形、光滑菌落，无色素，直径0.5～2mm，不溶血（图6-5-2）；在巧克力平板上为圆形、光滑、稍凸起、奶油状菌落（图6-5-3）。在血清或胰蛋白胨酵母的肉汤中，37℃培养48h，呈上下一致轻微混浊，试管底部仅有少量沉淀。在麦康凯培养基上不生长。培养物置4℃冰箱保存容易死亡，通常4～5 天应继代一次。

3.生化反应

本菌不发酵蔗糖和葡萄糖，极少数菌株发酵麦芽糖或肌醇。靛基质、硝酸盐还原、柠檬酸盐利用、V-P 试验、甲基红试验等均为阴性。不产生硫化氢，不分解尿素。液化明胶，氧化酶和触酶试验阳性。

4.分离鉴定

（1）鸭疫里氏杆菌分离鉴定流程：发病初期病鸭的心血、纤维素渗出物等进行瑞氏染色镜检，观察是否有两极着色的短小杆菌；对发病初期病鸭的脑、心血和肝脏，接种巧克力琼脂平板，置烛缸内，37℃培养24h 进行分离，有圆形、光滑、稍凸起、奶油状菌落生长，不溶血，革兰阴性，为可疑菌落。将可疑菌落接种在麦康凯培养基上不生长。选择商品化试剂进行细菌鉴定，具体流程见图6-5-4。(https://www.daowen.com)

（2）鸭疫里氏杆菌与多杀性巴氏杆菌鉴别：对可疑菌落进行葡萄糖和蔗糖发酵试验，鸭疫里氏杆菌不发酵葡萄糖和蔗糖，多杀性巴氏杆菌发酵葡萄糖和蔗糖（图6-5-5）；也可以用商品化细菌鉴定试剂盒进行鉴定。

（3）PCR 检测：对病料分离的纯培养物进行PCR 检测，选择煮沸法提取细菌DNA。扩增片段长度671bp。

① 引物序列：OmpA-1：5′-GAACTTTGGTCTTGGTAT CC-3′

OmpA-2：5′-CAGATGCAGCTCTTTCTC TA-3′

② 扩增体系：25µl 总体系。Premix 12.5µl，ddH2O 8.5µl，引物各1µl，DNA 模板2µl。

③ 扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性40s，55.5℃退火40s，72℃延伸45s，35 个循环；72℃延伸10min。