副鸡禽杆菌(A.paragallinarum)
副鸡禽杆菌原称副鸡嗜血杆菌,2005 年Blackall 等人依据生长、生化特性和16SrRNA将其改名为副鸡禽杆菌。该菌主要感染雏鸡和蛋鸡,可引起鸡的传染性鼻炎,以鼻窦炎、流鼻涕、打喷嚏和面部肿胀为主要症状,可造成淘汰鸡数量增加及蛋鸡产蛋率下降。
1.形态染色
副鸡禽杆菌为革兰阴性菌,两极染色(图6-4-1)。菌体呈短杆状或球杆状,少数呈多形性,多呈单菌存在,有时成对或短链状,菌体长1~3µm、宽0.4~0.8µm。本菌无荚膜、芽孢和鞭毛(图6-4-2)。
图6-4-1 副鸡禽杆菌的革兰染色形态
图6-4-2 副鸡禽杆菌的电镜扫描照片
2.培养特性
副鸡禽杆菌兼性厌氧型,需要在含有5% CO2的培养环境中生长。对营养要求非常高,需在添加V 因子的培养基中生长,加入其他营养成分如牛血清可促使菌株快速生长。
本菌在麦康凯琼脂上不生长;在巧克力琼脂平板上培养18~24h 可看到针尖大小、直径0.3mm 左右、灰白色半透明状的圆形菌落(图6-4-3)。在巧克力琼脂平板上生长时遇到可释放出V 因子的其他细菌如葡萄球菌,两者在交叉划线后,可产生“卫星现象”,即可见到葡萄球菌周围的副鸡禽杆菌菌落较大(直径可达0.3mm),而远离葡萄球菌的副鸡禽杆菌菌落较小。
图6-4-3 副鸡禽杆菌在巧克力平板上的菌落形态
3.生化反应
该细菌能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、甘露糖和甘露醇,不发酵半乳糖,不产气,不产生吲哚,不分解尿素。含有过氧化氢酶,具有氧化酶活性和碱性磷酸酶活性、半乳糖苷酶与还原硝酸为亚硝酸的能力,但没有触酶反应。可根据以上特征和其他禽类嗜血杆菌区别开。
4.分离鉴定(https://www.daowen.com)
(1)分离鉴定流程:副鸡禽杆菌的鉴定流程见图6-4-4。
(2)生化鉴定:取纯化后的菌落做触酶试验,必要时做进一步的生化反应,可参考《鸡传染性鼻炎诊断技术》(NY/T 538—2015)。副鸡禽杆菌与其他禽杆菌的生化和培养特性见表6-4-1。
图6-4-4 副鸡嗜血杆菌的鉴定流程
表6-4-1 副鸡禽杆菌与其他禽杆菌的生化和培养特性
注:所有菌为革兰阴性,副鸡禽杆菌、沃尔安禽杆菌、禽禽杆菌、A 种禽杆菌对V 因子要求不定,鸡禽杆菌需要X、V 因子。V 为可变。
(3)PCR 鉴定:可以根据副鸡禽杆菌的pyrG 基因、aroA 基因等设计引物,建立PCR检测方法,参考《鸡传染性鼻炎诊断技术》(NY/T 538—2015),扩增片段长度500bp。
① 引物序列:上游引物:5′-TGAGGGTAGTCTTGCACGCGAAT-3′
下游引物:5′-CAAGGTATCGATCGTCTCTCTACT-3′
② 扩增条件:94℃ 5min;94℃ 45s,56℃ 45s,72℃ 1min,30 个循环;72℃ 10min。
阳性对照和被检样品均出现500bp 的条带且阴性对照样品无此条带,则判为阳性。