布鲁菌

布鲁菌

布鲁菌属于布鲁菌属，由其引起的病叫做布鲁菌病，是一种人兽共患病，被世界动物卫生组织列为B 类动物疫病。根据细菌抗原特性、培养特性、生化特性及宿主特异性的不同，布鲁菌属分为羊种布鲁菌（B.melitensis，3 个生物型）、牛种布鲁菌（B.abortus，8 个生物型）、猪种布鲁菌（B.suis，5 个生物型）、犬种布鲁菌（B.canis，1 个生物型）、沙林鼠种布鲁菌（B.neotomae，1 个生物型）和绵羊附睾种布鲁菌（B.ovis，1 个生物型）6 个经典种，以及狒种（B.popionis）、赤弧种（B.vucpis）、鲸型（B.let）、鳍型（B.pinnipedialis）、意外布鲁菌（B.inopinata）、田鼠种（B.microti）等6 个新种，其中羊种布鲁菌为模式种。

1.形态染色

布鲁菌宽0.3～0.6µm、长0.6～1.5µm，呈短杆状或球杆状，多呈散在分布，偶见短链状、成对或串状排列（图8-1-1），光滑型菌株，有荚膜，无鞭毛，不产芽孢。布鲁菌革兰染色呈红色（图8-1-2），姬姆萨染色呈紫色，柯兹罗夫斯基染色（柯氏染色）呈红色，改良Koster 氏法染色背景蓝色、菌体橘红色，改良Ziehl-Neelsen 抗酸染色背景蓝色、菌体红色。

2.培养特性

布鲁菌专性需氧，在严格厌氧环境中不生长。最适温度37℃，最适pH 为6.6～6.8。多数菌株初次分离培养需5%～10% CO2，且生长十分缓慢，需要5～10 天甚至30 天。菌株在培养一段时间后，可形成4 种不同菌落，即光滑型（S 型）、粗糙型（R 型）、黏液型（M 型）和中间型（I 型）。其中，粗糙型菌落往往在细菌经受不良环境如抗生素的影响下形成，表面呈颗粒状，不透明，呈浅黄色或褐色；光滑型菌落表面光滑湿润、无色透明；黏液型菌落呈黏胶状，混浊；中间型菌落介于光滑型和粗糙型菌落之间。

布鲁菌对营养要求高，在培养基中加入少量血液或血清等可促其生长，含5%～10%马血清的胰蛋白胨大豆琼脂培养基几乎对所有菌株都能生长。初次培养生长缓慢，经37℃培养48h 开始长出微小、无色、透明、凸起的光滑型菌落，无溶血现象。布鲁菌在血琼脂平板上为白色菌落，不溶血（图8-1-3）；在马铃薯琼脂斜面上生长出水溶性微棕色菌苔。

3.生化反应

布鲁菌对触酶、氧化酶反应阳性，但绵羊种和绵羊附睾种布鲁菌除外。除绵羊附睾种布鲁菌外，一般不能还原硝酸盐。甲基红试验、糖发酵、吲哚、柠檬酸盐利用、V-P试验等反应均为阴性，不液化明胶，不产生吲哚，不改变石蕊牛乳或使之呈碱性。不同种不同生物型的布鲁菌水解尿素和产生H2S 的能力各异。

4.分离鉴定(https://www.daowen.com)

（1）分离鉴定流程：可采集流产胎儿的胎盘、羊水，肝脏、肺脏和脾脏等内脏，阴道分泌物、血液、精液和乳汁等病料进行分离。病料可直接涂片染色镜检。无污染病料可直接划线接种于5%～10%马血清的TSA。污染的病料则应接种到加有放线菌酮0.1mg/ml、杆菌肽25 IU/ml、多黏菌素B 6IU/ml 和加有色素的选择性琼脂平板，一式两份，分别置37℃培养箱和5%～10% CO2的37℃培养箱中培养。每3 天观察1 次。如有细菌生长，挑选可疑菌落纯化后进行细菌鉴定；如无细菌生长，可继续培养至30 天后仍无生长者方可认为阴性。具体流程见图8-1-4。

（2）生化鉴定：利用一些生化反应的强弱可区分不同种的布鲁菌。根据布鲁菌脲酶活性和H2S 产生的多少，可鉴别羊、牛和猪3 种常见的布鲁菌。分解尿素，即脲酶活性：猪＞羊＞牛；产H2S 能力：猪＞牛＞羊。

（3）PCR 鉴定：PCR 是确诊布鲁菌阳性的方法之一。在WOAH 的《陆生动物诊断试验与疫苗手册》中提供了一种多重PCR 方法，共8 对引物。该方法可区分疫苗株及不同种的布鲁菌。引物信息见表8-1-1。布鲁菌不同种及疫苗株扩增片段大小见表8-1-2。

反应体系：总体积25µl，DNA 模板1µl，每条引物6.25pmol。反应条件：95℃预变性 7min；95℃变性 35s，64℃ 退火45s，72℃ 延伸3min，25 个循环；72℃ 延伸6min。