支气管败血波氏菌(B.bronchiseptica)
支气管败血波氏菌最初由Ferry 于1910 年从患犬瘟热犬的呼吸道中分离得到,当时被列入芽孢杆菌属。之后,鉴于支气管败血波氏菌的培养特性、抗原关系、致病性都和波氏菌相似,最终由Moreno-Lopez 在1952 年将其列入波氏菌属。该菌为化能有机营养,可利用不同的有机酸和氨基酸为碳源,通常不利用糖类。该菌可引起猪、狗、豚鼠、兔子、猫、马等动物呼吸道感染,常引发幼兔支气管炎、成兔的鼻炎、猪萎缩性鼻炎及犬支气管肺炎。
1.形态染色
支气管败血波氏菌两极着色,革兰染色阴性(图8-2-1)。菌体呈球杆状,大小为(0.2~0.3µm)×(0.5~1.0µm),单个或成双排列,菌体周围有鞭毛(图7-2-2)。嗜氧,能运动,不形成芽孢。
2.培养特性
支气管败血波氏菌专性需氧,最佳生长温度范围为35~37℃,在25℃和42℃也可生长。在以5%羊血平板上培养24~48h,菌落圆形、光滑、边缘整齐(图8-2-3),直径0.5~1mm,某些菌株可发生β 溶血。在鲍-姜氏培养基上,菌落呈光滑、隆起、半透明、湿润。在麦康凯培养基上生长良好,菌落红色,周围有一个小的红色区域,底层培养基呈琥珀色褪色(图8-2-4)。在血红素呋喃唑酮改良麦康凯琼脂(HFMA)平板上,菌落不变红,直径1~2mm,圆整、光滑、隆起、透明,略呈茶色,较大的菌落中心较厚、呈茶黄色,对光观察呈浅蓝色。
图8-2-1 革兰染色形态
图8-2-2 支气管败血波氏菌的扫描电镜照片
图8-2-3 支气管败血波氏菌在血平板上的菌落形态
图8-2-4 支气管败血波氏菌在麦康凯培养基上的菌落形态
3.生化反应
支气管败血波氏菌能产生过氧化氢酶、氧化酶和脲酶,能利用枸橼酸盐。不分解糖类,葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、卫矛醇、山梨醇、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、水杨苷、七叶苷等均为阴性;可利用己二酸、甘氨酸、丙酰胺、丙二酰胺、戊酸盐、丙二酸等产碱。V-P 试验、甲基红试验、靛基质试验、H2S 试验均为阴性,硝酸盐还原试验多呈阳性,石蕊牛乳试验呈强碱性反应。
4.分离鉴定(https://www.daowen.com)
(1)分离鉴定流程:见图8-2-5。
图 8-2-5 支气管败血波氏菌的分离鉴定流程
(2)与其他细菌的鉴别:主要有以下几种
① 支气管败血波氏菌与禽博德特菌的鉴别:支气管败血波氏菌对脲酶和硝酸盐还原试验均为阳性,禽波氏菌均为阴性。也可利用两者对动物红细胞凝集的不同来判断,支气管败血波氏菌凝集绵羊红细胞,禽波氏菌凝集豚鼠红细胞。
② 支气管败血波氏菌与多杀性巴氏杆菌的鉴别:支气管败血波氏菌不能分解葡萄糖、蔗糖和甘露糖,而多杀性巴氏杆菌可分解葡萄糖、甘露糖和蔗糖。
(3)PCR 鉴定:对从病料分离的纯培养物进行支气管败血波氏菌PCR 检测,用煮沸法提取细菌DNA。
① 支气管败血波氏菌的引物序列:
Bb-F:5′-CAGGAACATGCCCTTTG-3′
Bb-R:5′-TCCCAAGAGAGAAAGGCT-3′
② 支气管败血波氏菌PCR 扩增条件:95℃变性5min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸20s,35 个循环,最后72℃延伸5min。