双靶点CAR-T细胞构建

利用293T细胞包装病毒后待用；利用磁分选技术纯化ESCC患者或健康人来源的CD3+ T细胞，加入CD3/CD28磁珠活化48小时，然后加入病毒上清进行感染；感染后加入含IL-2的新鲜培养基进行扩增，并在感染后72小时检测CAR表达水平。

流式检测结果显示，T细胞能够有效被慢病毒将外源基因整合到基因组中，表达高水平的双靶点CAR；而scFv排列顺序不影响CAR表达水平（图16-18）。(https://www.daowen.com)

图16-18　T 细胞表达CAR 水平