双靶点CAR-T细胞构建及功能鉴定

本部分工作主要开展双靶点CAR-T（tanCAR-T）细胞构建及其增生和杀伤等分析，探讨双靶点CAR-T细胞杀伤食管鳞癌细胞的能力。主要工作包括：双靶点CAR序列表达质粒构建，根据文献报道，合成CD276和HER2特异性的2代tanCAR全序列，并克隆入慢病毒表达质粒，构建CAR表达质粒；生产慢病毒，利用磷酸钙将质粒转染293T细胞，收集病毒上清，测定病毒滴度后待用；制备CAR-T细胞，将纯化的CD8+ T细胞加入CD3/CD28磁珠活化48小时后，加入病毒感染；感染72小时后，测定tanCAR阳性T细胞比例；观察tanCAR-T细胞杀伤肿瘤细胞的活性。(https://www.daowen.com)