2.1.1 实验室设置
细胞培养是在严格的无菌条件下进行,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其他有害因素的影响。细胞培养室的设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘。无菌操作区应设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养位于一室,而洗刷消毒在另一室,既保证无菌操作,又便于操作人员工作。
1)基本实验室
(1)洗涤间
洗涤间主要用于玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制为30~50 m2。在房间一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗培养用品。中央实验台两侧还应配置水槽,用于清洗小型玻璃器皿。若工作量大,可以配置一台洗瓶机。配备1~2个洗液缸,专门用于洗涤对洁净度要求高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿且排水良好。
(2)培养基配制间
培养基配制间面积约60 m2,配备的主要仪器设备有冰箱、不同感量的天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、真空泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶等。
(3)消毒间
消毒间用于培养基及培养器械的灭菌。配备实验台、高压灭菌锅、排风和灭火装备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。
灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产型的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。
若实验室面积有限,可将上述工作间合并成一个准备室,仪器设备的安装和放置要合理,便于操作,房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。
(4)无菌操作室
无菌操作室也称无菌室或接种室,是进行无菌操作的场所,如材料的无菌接种、无菌培养物的继代、培养物的转移等,是细胞培养的重要场所,必须定期消毒,严格无菌。消毒方法可采用紫外线照射、气雾熏蒸(如甲醛)或药品喷洒。设计无菌室时要注意:环境干爽、清洁,位于区域上风位置;空间宜小不宜大,便于消毒;地面、天花板及四壁密闭光滑,无卫生死角。(https://www.daowen.com)
无菌室通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作和防止污染。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内设有水槽、实验台、鞋帽架、柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。无菌室主要仪器设备为超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
(5)培养室
培养室是将接种到培养瓶等器皿中的细胞组织进行培养的场所。为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留有一个通气窗,并安装排气扇。室内温度由空调控制,光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,分别为光照培养室和暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。
培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离为20 cm,光照强度为2 000~3 000 lx。
对于动物细胞培养室,侧部可设传递窗,用于物品传递,要配置专门的CO2培养箱,生物安全柜等。
2)辅助实验室
(1)细胞鉴定室
细胞鉴定室是对培养材料进行细胞学鉴定和研究的场所,在有条件的情况下可建立此实验室。要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。
(2)生化分析室
在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。一般配备离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等。
(3)驯化移植室
驯化移植室用于试管小植株的炼苗和移植,为试管苗的生长提供合适的环境条件,应备有温室、迷雾装置、荫棚、移植床、钵、盆、塑料布、蛭石等。