7.2.1 常温限制生长保存
在常温条件下的组织培养不适合种质保存。因为材料在正常条件下生长很快,需要经常转接。通过高渗、生长抑制剂以及其他一些措施也具有延缓离体培养材料生长发育、延长继代转接时间,从而达到常温下保存离体培养材料的目的。
1)高渗保存法
高渗保存法是利用培养基的高渗透压来抑制离体培养材料生长的保存方法。培养基中高渗透压的产生可以通过加入高渗物质,如甘露醇、蔗糖、PEG等。高渗保存并配以低温则具有更好效果,能够显著延长种质保存时间,提高存活率。
2)生长抑制剂保存法
生长抑制剂保存法是在培养基中加入生长抑制剂以减缓培养材料生长,达到长期保存种质材料的保存方法。常用的生长调节剂有ABA、青鲜素、矮壮素(CCC)、多效唑、烯效唑、比久等,它们可以有效控制和延缓培养材料的生长速度,延长继代培养周期。如2 mg/L多效唑可以延缓玉米试管苗生长25~30天,4 mg/L时为40~50天,8 mg/L时为80~90天。将甘露醇与生长抑制剂一起使用,可增强抑制作用。
3)抑制生长的其他保存法
(1)饥饿法(https://www.daowen.com)
以培养基中减去1~2种营养元素,使培养植株由于营养缺乏而处于最小生长量。
(2)矿物油覆盖法
利用矿物油覆盖培养材料使其与空气隔绝,延缓生长,如胡萝卜愈伤组织在覆盖一层植物油的试管中培养,26℃下,5个月继代一次,可以保存活力达3年。
(3)低光照培养
在低温条件下,适当减弱光照强度、缩短光照时间可以减缓试管苗生长。利用低温、弱光照、生长抑制剂处理的最小量生长条件保存马铃薯种质资源已经在国内外得到广泛应用。
(4)低压保存
通过降低培养材料周围的气压,导致所有气体分压被降低,达到抑制生长的目的。低压保存包括低气压和低氧压两种。低氧压系统是在正常气压下,加入氮气等惰性气体,使氧分压降至较低水平。