11.1.2 细胞重组原料的制备
细胞质、核体和微细胞是细胞重组常用的几个原料，其制备过程简述如下。
1）胞质体制备
将细胞培养于内径略小于离心管的培养皿上，一般培养2天以上，待细胞汇合后，向离心管中加入37℃预热的细胞松弛素B（CB）溶液，体积为离心管体积的1／5～1／10，细胞面朝下水平放入CB溶液，再加圆形栓固定细胞板，盖上离心管12 000 r／min离心20 min，有80%的细胞脱核。
脂质体的制备主要有玻璃盖片法、塑料片法、载玻片法、离心管法、培养皿法、培养瓶法、悬液法等。
离心脱核法及离心后核体与胞质分离情况如图11.1所示。
图11.1 离心脱核法及离心后核体与胞质分离情况
2）核体制备(https://www.daowen.com)
按上述去核过程，即可得到无核的胞质体和细胞核，但在被分离出的核中带有少量胞质并围有质膜，此即为“核体”。
核体能重新再生其胞质部分，继续生长、分裂，因此为了生产大量的核体，必须采用一系列的纯化技术，以防夹杂完整细胞和胞质体。可在去核处理后，从离心管底部收集样品，接种于培养皿内，温育1～2 h，由于核体的贴壁率大大低于残留完整细胞的贴壁率，可从上清液中收集得到较纯净的核体。如此重复1～2次，可使核体的纯度高达99%。
3）微细胞制备
微细胞制备是动物细胞在秋水仙素及其衍生物和长春新碱等有丝分裂阻断剂的干扰作用下，致使染色体停滞在有丝分裂中期，形成大小不同的多个微核在CB作用下使微核从细胞中分离出来的过程。制备的时候，用1μg／mL秋水仙碱长时间（＞48 h）处理细胞，细胞分裂就被控制在分裂中期，此时染色体动力终止，在单个染色体或染色体群的周缘重现核膜，形成了大小不同的多个微核，此时的细胞就称为微核化细胞。一般12 000 r／min离心20min，即可脱核80%～90%。
微细胞的制作过程如图11.2所示。
图11.2 微细胞的制作过程
以上述方法从活细胞中拆散出来的胞质体、核体、微细胞为材料，通过显微操纵术，在光学显微镜下用显微操纵器把材料重新组合，加入病毒或化学物质如聚乙二醇等融合因子，经过一段时间的作用，可以把它们更新装配成新的活细胞。
