11.2.1 核移植技术的一般操作程序
核移植技术主要包括供体核的获得、受体细胞去核、核卵重组、细胞融合／激活、重组胚培养、胚胎移植6个操作步骤。
1）供体核的获得
供体核可以是早期胚胎细胞、胚胎干细胞和体细胞。供体细胞核的制备方法是首先将器官或组织进行机械切割，用胰蛋白酶溶液水解一定时间后，解离出单个的细胞，然后在显微操作仪下用微量吸管将细胞核吸出来。
2）受体细胞去核
细胞核移植的受体细胞一般运用减数第二次分裂时期的卵母细胞。卵细胞去核的方法有盲吸法、离心法和紫外线照射法等。盲吸法指用微细玻璃管在第一极体下盲吸，吸除第一极体及处于分裂中期的染色体和周围部分细胞质的方法，该法成功率较低。离心法是对卵母细胞进行离心，在不同渗透压梯度下将核分离出来的方法。两栖类细胞一般采用紫外线照射法达到去核的目的。
3）核卵重组
核卵重组是在显微操作仪操纵下，用移植针吸取供体细胞核并注入去核的受体卵母细胞中的过程。有胞质内注射和透明带下注射两种方法。(https://www.daowen.com)
4）细胞融合／激活
无论是受精引起的卵母细胞激活还是人工激活，都会引起卵母细胞发生一系列的反应，这些反应是胚胎发育所必需的。人工激活的方法有仙台病毒法、电融合法等，后者更常用，其激活原理是通过电刺激，使卵母细胞进入“受精”的状态。
5）重组胚培养
经融合或激活的重组胚移入中间受体作体内或体外培养，观察重组胚的发育率。重组胚需一定时间的培养，方可移植到受体，家兔和猪重组胚在体外培养24 h以内，就可通过非手术移植，而羊和牛重组胚所需培养时间较长，一般发育到囊胚或桑葚胚时移植。培养的方法是可将融合的重组胚放于含血清的培养基培养，也可移入同种或异种的输卵管中进行培养，几天后冲洗输卵管，回收重构胚。
6）胚胎移植
重组克隆胚胎移植的受体母畜要选择皮毛颜色与供体品种不同、繁殖性能强、体格稍大的当地品种。进行同期发育处理，按常规方法移植代孕母畜的子宫中，待其发育到产仔。
