实验五 紫外-分光光度法测定苯甲酸的含量
一、实验目的
（1）会正确使用紫外分光光度计。
（2）能使用紫外分光光度计测定苯甲酸的含量。
二、实验原理
一般具有芳香环、共轭双键等结构的药物，均可在紫外区（190～400nm）或可见光区（400～760nm）产生吸收。可用紫外-可见分光光度法进行鉴别、检查及测定含量。
紫外-可见分光光度法的依据是朗伯-比尔定律：当一束平行的单色光通过均匀、无散射现象的溶液时，在单色光强度、溶液的温度不变的情况下，溶液对光的吸光度（A）与溶液的浓度（C）及液层的厚度（L）的乘积成正比。朗伯-比尔定律是吸收光度法的基本定律，其数学表达式为：
A=ECL
公式中，C为供试溶液的浓度；E为吸收系数；L为溶液的厚度，即吸收池（比色皿）的厚度，单位为cm，一般无特殊说明时，常用厚度为1cm的比色皿。
在紫外可见的范围内，对于一个特定的波长、吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
三、器材与试剂
UV-1800PC-DS2紫外-可见分光光度计，石英吸收池，容量瓶；
苯甲酸标准样品，氢氧化钠。
四、实验步骤
1.苯甲酸标准溶液和待测标准溶液的配制
（1）标准样品的制备：称取苯甲酸100mg，用0.lmol/L氢氧化钠溶液100ml溶解后，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，此溶液1ml含0.1mg苯甲酸，即为苯甲酸标准样品。
（2）标准溶液的配制：分别量取苯甲酸标准样品2ml、4ml、6ml、8ml、10ml各置于50ml容量瓶中，用0.0lmol/L氢氧化钠溶液定容、摇匀。此时溶液的浓度分别是4μg/ml，8μg/ml，12μg/ml，16μg/ml，20μg/ml，为苯甲酸标准溶液。
（3）待测标准溶液的配制：根据苯甲酸的标样配制成一定浓度的待测溶液（0.01mol/L氢氧化钠溶液作溶剂）。
2.吸收曲线的绘制
（1）开机：打开计算机，待系统完全启动后，打开紫外-可见分光光度计主机电源。
（2）仪器初始化：在计算机窗口上双击软件图标，仪器进行自检（自检时不得把吸收池上方的盖子打开），大约需要4min。进入人工界面，预热30min。
（3）任意选择一个标准溶液浓度，进行光谱扫描。
①参数设置 光谱扫描窗口下，选择菜单栏上的参数设置，在测量中设置所需参数：波长范围（起始波长大，结束波长小）；测光方式（一般为ABS或T%）；扫描速度（一般为中速）；采样间隔（一般为1nm或0.5nm）；记录范围（一般为0～1）。
②基线校正 2个吸收池中都放入空白溶液，单击“基线”进行校正，校完后单击“确定”，取出外池空白溶液。
③扫描 外池放入任一浓度标准溶液，单击“开始”进行扫描，得到吸收光谱曲线，单击“波峰”峰值检出，得到几个吸收峰的位置，找到最大吸收峰的波长用作下面的测量。
3.利用标准曲线测量待测样品含量
（1）参数设置：定量测定窗口下，选择菜单栏上的参数设置，在测量中设置所需参数：测量模式（一般为单波长）；输入测量波长；选择曲线方程（一般为c=K0A+K1……）；选择浓度单位。
（2）校零：2个吸收池中都放入空白溶液，单击“校零”图标进行校零，校完后取出外池空白溶液。
（3）测量标准样品：输入标准样品的编号和浓度，放入第一个浓度的标准样品，将鼠标移到第一个标准样品测量表格，单击“开始”图标。以此类推，将所有标准样品测完。检查标准曲线相关系数R2值情况，一般R2≥0.999的标准曲线方可使用。
（4）未知样品测定：外池中放入未知样品，将鼠标移动到未知样品测量表格，单击“开始”图标，即可测出样品吸光值，根据已得到的线性方程和相关系数计算出待测样品的含量。
4.整理关机
测量完成后，退出软件操作系统，依次关掉紫外-可见分光光度计主机电源、计算机，盖上防尘罩；将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。
五、注意事项
（1）空白溶液与供试品溶液必须澄清。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。
（2）测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照。
（3）一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。
（4）吸收池应选择配对，否则要引入测定误差。在规定波长下2个吸收池的透光率相差小于0.5%的吸收池作配对，在必要的情况时，须在最终测量扣除吸收池间的误差修正值。
（5）由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品前要先用配制供试品溶液的同瓶溶剂进行空白校零。
（6）在测定时或改测其他检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损）。
（7）取吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免沾上油污。使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。
六、分析思考
（1）紫外-可见分光光度计的基本构造是怎样的？
（2）如何提高测定灵敏度和准确度？
七、实训报告单附表
紫外-可见分光光度法测定苯甲酸的含量原始记录单
（每场按台架号从小到大排列后装入回收专用袋。）
学 校____，姓 名____，准考证号____
考点名称____，场次号____，台架号____
题目：紫外-可见分光光度法测定苯甲酸的含量
1.能准确使用电子天平、容量瓶、紫外-可见分光光度计，能正确进行原始记录并计算。
2.配制苯甲酸标准溶液和待测溶液，绘制吸收曲线，测定苯甲酸的含量。
操作步骤：
记录人：日期：