超净工作台(至少3台)
虽然配子或胚胎体外发育主要在培养箱内,但几乎每天还是会对配子或胚胎进行一些箱外操作。超净工作台是IVF实验室必不可少的一种设备,为配子、胚胎体外操作提供洁净且符合生物安全的环境。
超净工作台主要组成部分有:滤器(高效过滤器、初效过滤器)、风机、电气控制及排气通道等。主要通过风机将空气吸入预过滤器,经由静压箱进入高效过滤器过滤,将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出,使操作区域达到百级洁净度。水平气流的超净工作台存在使操作者遭受液体及烟雾侵袭的风险。IVF过程中配子或胚胎的体外操作要求在百级区完成,为使超净工作台一直处于良好的状态,对其进行定期的维护是非常重要的;随着技术的发展现已有专门用于生殖实验室的超净工作台供使用,称为“IVF工作站”,其相较传统的超净工作台还集成了恒温平板、培养箱、可调节光源、CCD相机等进阶设备,设施完备的可优化胚胎或配子培养箱外操作条件,尽可能避免或减少胚胎应激。
实验室中根据不同用途设置专用的超净工作台,便于设定某种操作均有专用的场所和设备,避免同时开展工作时发生冲突。
1.捡卵、授精专用IVF工作站(图3.43):
捡卵、授精专用IVF工作站的配置包括体视显微镜、恒温热台、可调节光源、桌面培养箱及身份核对系统等。为方便教学、质量控制及信息核对,也应配有实时成像系统供多人同时进行观察及保存图像资料,而且为方便取卵室与实验室之间的卵泡液传递,必须将取卵工作位临近取卵室的传递窗位置。
图3.43 捡卵、授精卵专用IVF工作站
为方便工作,在日常工作中将集成于专用IVF工作站的各种设备进行统一管理和质控,具体日常使用原则如下:
(1)IVF Tech工作站Ⅰ,主要用于捡卵/授精/剥卵/选胚/换液。每次进入实验室后如有必要应提前预热工作站热台,顺序为先打开工作站热台,待温度稳定于37℃方可开启显微镜热台,避免热台过热损伤标本,同时开启工作站风机保持其净化效果。
(2)使用前首先确定本次用途,提前将所需的实验耗材及试剂根据使用量放入操作区域,使用过程中注意无菌操作,避免反复出入工作区域,记录实验开始和结束时间,使用过后将玻璃器具放入利器盒丢弃,其他垃圾放入台下医疗垃圾桶丢弃。
(3)使用结束后整理使用过的各项物品使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,移液器调至最大量程,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,后先关闭显微镜电源及加热台再关闭工作站加热台。
(4)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,确保关闭所有电源。
(5)工作站HEPA滤芯根据实验室计划及时更换。
(6)每日认真记录设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.15)
表3.15 胚胎实验室IVF工作站I(捡卵、授精用)日常使用记录表
2.ICSI、胚胎装载专用IVF工作站(图3.43):
图3.44 ICSI、胚胎装载专用IVF工作站
ICSI、胚胎装载专用IVF工作站集成了防震台、恒温热台、显微操作仪、激光破膜仪、倒置显微镜(含恒温平台)及信息核对系统等。其中激光破膜仪也配有实时观测摄像头,也具有显示屏同步显示的功能,从而满足教学、图片视频信息留存及质控功能;工作站胚胎装载工作位应临近胚胎移植室的门,缩短装胚后实验室工作人员移动距离,确保胚胎安全。(https://www.daowen.com)
为方便工作,在日常工作中将集成于专用IVF工作站的各种设备进行统一管理和质控具体日常使用原则如下:
(1)IVF Tech工作站Ⅱ,主要用于ICSI/胚胎评价/辅助孵化/装胚。每次进入实验室后如有必要应提前预热工作站热台,顺序为先打开工作站热台,待温度稳定于37℃方可开启显微镜热台,避免热台过热损伤标本,同时开启工作站风机保持其净化效果。
(2)使用前首先确定本次用途,提前将所需的实验耗材及试剂根据使用量放入操作区域,使用过程中注意无菌操作,避免反复出入工作区域,记录实验开始和结束时间,使用过后将玻璃器具放入利器盒丢弃,其他垃圾放入台下医疗垃圾桶丢弃。
(3)使用结束后整理使用过的各项物品使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,移液器调至最大量程,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,后先关闭显微镜电源及加热台再关闭工作站加热台。
(4)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒;确保关闭所有电源。
(5)工作站HEPA滤芯根据实验室计划及时更换。
(6)工作站还兼备进行辅助孵化、胚胎评价等用途,根据实际情况记录IVF工作站使用方式。
(7)每日认真填写设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.16)
表3.16 胚胎实验室IVF工作站II(ICSI,胚胎评价、辅助孵化、装胚用)日常使用记录表
3.冷冻解冻专用IVF工作站:
冷冻解冻专用IVF工作站中需包含冷冻解冻专用显微镜、桌面培养箱、恒温平板等,除此之外为适配冷冻解冻的用途,需配有标签识别和信息核对识别装置,而且因需要摆放冻存盒、冷冻解冻试剂、计时设备等需预留更大的空间,不宜过于拥挤(图3.45)。
根据冷冻解冻装用的特点制定IVF工作站使用及质控流程如下:
(1)ASTEC工作站Ⅲ,主要用于胚胎冷冻解冻。每次需要进行冷冻解冻时,提前预热工作站热台,热台温度稳定于37℃时,方可开始操作,同时开启工作站风机保持其净化效果。
(2)使用前首先确定本次用途,提前将所需的实验耗材及试剂根据使用量放入操作区域,使用过程中注意无菌操作,避免反复出入工作区域,记录实验开始和结束时间,使用过后将玻璃器具放入利器盒丢弃,其他垃圾放入台下医疗垃圾桶丢弃。
(3)使用结束后整理使用过的各项物品使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,移液器调至最大量程,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,之后先关闭显微镜电源及加热台,再关闭工作站加热台。
图3.45 冷冻解冻专用IVF工作站
(4)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,确保关闭所有电源。
(5)工作站HEPA滤芯根据实验室计划及时更换。
(6)每日认真填写设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.17)
表3.17 胚胎实验室IVF工作站III(冷冻解冻专用)日常使用记录表
4.备皿专用洁净工作台:
为更好地达到专机专用、污染洁净分离的目的,设置了专门用于备皿的超净工作台(图3.46),也可作为耗材暂存的位置,便于出厂时残留的VOCs挥发,优化胚胎培养条件,具体使用方式如下:
图3.46 备皿专用洁净工作台
(1)每日使用洁净工作台之前进行使用前准备工作,使用前紫外线照射不少于30min,开始实验前应打开风机进行5min以上通风方可开始试验。
(2)实验操作开始前将试剂耗材备好放入洁净工作台内方可开始实验,避免操作中反复出入操作区域。
(3)使用结束后整理使用过的各项物品,并填补使用完毕的耗材,将移液器调至最大量程,倾倒垃圾桶,对台面进行消毒擦拭,用后紫外线照射不少于30min。
(4)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,关闭所有电源。
(5)每日认真填写设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.18)
表3.18 胚胎实验室备皿专用洁净工作台日常使用记录表
5.拉针、分装专用洁净工作台:实验室配备拉针、分装专用洁净工作台(图3.47),专门用于相关操作,可保证新开试剂的安全;在固定的地方使用丁烷灯、酒精灯等热源也有利于保证实验室的消防安全。具体方式如下:
(1)每日使用洁净工作台之前进行使用前准备工作,开始实验前应打开风机进行5min以上通风方可开始试验。
(2)使用结束后整理使用过的各项物品使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,移液器调至最大量程,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,用后紫外线照射应不少于30min。
(3)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,关闭所有电源。
(4)每日认真填写设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.19)
图3.47 拉针、分装专用洁净工作台
表3.19 胚胎实验室拉针、分装专用洁净工作台日常使用记录表
6.精液处理实验室分装、消毒专用洁净工作台:精液处理室所用的分装、消毒专用洁净工作台与胚胎实验室洁净工作台的使用内容及方式明显不同,故也作为专机专用设备进行管理,该洁净工作台在IUI精液处理室及IVF精液处理室各放置一台。具体操作流程如下:
(1)该洁净工作台主要用于精液处理室的各种试剂分装及对使用过后的组合试管架进行紫外消毒。每次使用目的应明确,无须每天记录,使用时记录即可。
(2)每次洁净工作台用于液体分装之前进行使用前准备工作,使用前紫外线照射应不少于30min,开始实验前应打开风机通风5min以上,点燃丁烷灯方可开始分装操作。
(3)每次使用洁净工作台紫外线消毒时,放入组合试管架后记录相关信息及填写《组合试管架使用消毒记录表》,并将消过毒的组合试管架暂存于该洁净工作台内备用。
(4)使用结束后整理使用过的各项物品,使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,检查移液器电量,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,用后紫外线照射不少于30min。
(5)每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,关闭所有电源。
(6)洁净工作台使用超6个月应对HEPA滤网进行保养更换。
(7)每日认真填写设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.20)
表3.20 精液处理实验室分装、消毒专用洁净工作台日常使用记录表( 年)HEPA使用第( - )个月IUI实验室□IVF实验□
7.精液处理室精液处理专用洁净工作台:精液处理室精液处理专用洁净工作台(图3.48)用于处理患者的精液标本,应配备身份识别系统进行验证,避免一次性耗材发生混用等情况,操作时也应该严格落实双人核对制度,具体操作方式如下:
(1)该洁净工作台主要用于精子优化处理。无须每天记录,使用时记录即可。
(2)每次洁净工作台用于精液处理之前要进行使用前准备工作,开启信息核对系统,并根据处理计划放入相应数量的组合试管架及所需的识别标签备用,之后紫外线照射不少于30min,开始实验前打开风机通风5min以上方可开始精液处理操作,如实记录实验开始和结束时间。
(3)使用结束后整理使用过的各项物品,使其处于正常可用状态,并填补使用完毕的耗材,检查移液器是否调至最大量程,确认利器盒是否需要更换,对台面进行消毒擦拭,之后紫外线照射并不少于30min。每日使用后进行仪器表面的清水擦拭和消毒,关闭所有电源。
(4)洁净工作台使用超6个月应对HEPA滤网进行保养更换。
(5)每日认真记录设备使用记录表,便于对各项操作进行溯源;且根据表格指引在设备使用前后进行设备巡检,完成准备工作和维护保养。(表3.21)
图3.48 精液处理专用洁净工作台
表3.21 精液处理室精液处理专用洁净工作台日常使用记录表( 年)HEPA使用第( - )个月 IUI实验室□IVF实验室□
