第六节 串联亲和纯化技术
细胞中很多重要的生命过程都是通过组成不同的蛋白质复合体来执行和调节的,但由于蛋白质成分鉴定的困难,大多数蛋白复合体都是未知的。近年来,质谱技术被广泛应用,成为鉴定未知蛋白的一个强有力的工具,这种优势在鉴定二维电泳技术分离得到的蛋白组分中得到充分发挥,但是这样得到的仅仅是一部分细胞总蛋白,代表的是大多数高丰度表达的多肽。因为质谱技术的高敏感性和处理各种样品的可行性,它也被用于鉴定蛋白复合体的组成亚基或相互作用蛋白,在这里最显著的限速步骤就是要得到大量纯化的蛋白复合体。很多标准的纯化复合体的生化方法应运而生,但是大多耗时、费力,因为每一步的纯化条件都要由每一个特定复合体具体决定,因此研究人员需要一种特异、可靠而且尽可能快速的通用蛋白复合体纯化方法。串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)即是满足这一要求的新方法。(https://www.daowen.com)