病原学检测方法
寄生虫的病原学检测技术可确诊疾病，但对早期、低虫荷感染或隐性感染常常漏诊。
一、粪便检查
粪便检查（fecal examination）是诊断寄生虫病常用的病原学检测方法。粪便标本应该新鲜；送检时间不超过24h；送检需要保温；盛器必须洁净，防止被其他物质污染；具体检查方法如下。
1.直接涂片法（direct wet smear） 主要是用以检查蠕虫卵、原虫包囊或滋养体。方法简便，建议连续作3次涂片检查，以提高检出率。蠕虫的涂片厚度以透过玻片隐约可辨认书上的字迹为宜。加盖片后用低倍镜或高倍镜观察。而原虫标本观察时涂片需要较薄，应注意保温以保持滋养体活力。
2.碘液染色法（iodine stain） 原虫的包囊可以进行碘液染色观察，以1滴碘液加入载玻片上，若需检查活滋养体，可在玻片另一侧滴1滴生理盐水，各自进行涂片，再盖上盖片；片中一侧查包囊；另一侧查活滋养体。
碘液的配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水至100ml定容。
直接涂片法操作如下：载玻片上滴加1滴生理盐水，用牙签挑取绿豆大小的粪便，自生理盐水滴中心向外作圆形涂抹，涂片厚度以透过玻片隐约可辨认印刷物上的字迹为宜。加盖片后用低倍镜或高倍镜观察（图6－1）。
图6－1 直接涂片法
3.改良加藤厚涂片法（Kato－Katz method） 透明液配制：量取蒸馏水和纯甘油各100 ml，混合后，再加入3％孔雀绿或亚甲基蓝1ml。储瓶备用；取亲水玻璃纸（25mm× 30mm×40μm）放入透明液中浸泡24h以上方可使用；将尼龙绢片（6cm×6cm，80目）置于粪便标本上，用刮棒自尼龙绢刮取粪便，使细粪渣通过尼龙绢片滤出至绢片表面；将定量板（圆台孔短径3mm，长径4mm，高1mm，容积为38.75mm3）置于载玻片中部，用刮棒将尼龙绢片表面的细粪渣填入圆台形孔中，使填满全孔并抹平；提起并移去定量板，取1张浸泡好的亲水玻璃纸，除去多余浸泡液，盖在粪样上，用橡皮塞或载玻片于玻璃纸上竖直均匀用力压制，使粪便均匀展开至玻璃纸边缘；透明0.5～1h后镜检，记录观察到的全部虫卵数。在大规模流行病学调查中，只要将每片的全部虫卵数乘以24，即得每克粪便虫卵数（EPG）（图6－2）。
图6－2 改良加藤厚涂片法
4.饱和盐水浮聚法（brine flotation method） 此法用以检查钩虫卵效果最好，也可用于检查其他线虫卵和微小膜壳绦虫卵，但不适于检查吸虫卵和原虫包囊。用竹签取黄豆粒大小的粪便置于浮聚瓶中，加入少量饱和盐水调匀，再慢慢加入饱和盐水至液面略高于瓶口，以不溢出为止。此时在瓶口覆盖一载玻片，静置15min后，将载玻片提起并迅速翻转，镜检（图6－3）。
图6－3 饱和盐水浮聚法
5.沉淀法（sedimentation method） 最常用的是醛醚沉淀法，可以用于原虫包囊和蠕虫卵的检测，可浓缩粪便中的包囊和蠕虫卵，但不损伤包囊和虫卵的形态，便于观察和鉴定。取粪便1～2g（黄豆大小），加磷酸缓冲液（PBS）混匀制成悬液，滤过2层纱布以去除粗渣，滤过液600rpm离心1min，弃上清液，沉渣加入10％的甲醛－PBS 5ml，固定30min，加入3 ml乙醚，剧烈振摇1min，600g离心1min，弃上层液，以棉签擦净试管壁上的残液，直接镜检或碘液染色镜检（若为可疑AIDS患者，为安全起见，可直接以10％的甲醛－PBS 5ml或更多固定30min，再离心调节体积为5ml，其余步骤同前）。
6.肛门拭子法（anal swab method） 适用于检查在肛周产出的虫卵（蛲虫卵等）或常可在肛门附近发现的带绦虫卵。棉签拭子法先将棉签浸泡在生理盐水中，取出时挤去过多的盐水，在肛门周围擦拭，随后将棉签放入盛有饱和盐水的试管中，用力搅动，迅速提起棉签，在试管内壁挤干水分后弃去，再加饱和盐水至管口处，覆盖一载玻片，务必使其接触液面，5 min后取下载玻片镜检。也可将擦拭肛门的棉签放在盛清水的试管中，经充分浸泡，取出，在试管内壁挤去水分后弃去。试管静置10min，或经离心后，倒去上液，取沉渣镜检。另外，透明胶纸法用长约6cm，宽约2cm的透明胶纸有胶面，粘贴肛门周围的皮肤，取下后将有胶的一面平贴在玻片上，镜检（图6－4）。
图6－4 透明胶纸法
二、血液检查
血液检查是诊断疟疾、巴贝虫病、丝虫病的基本方法。涂制血膜用的载玻片用前需经洗涤液处理，再用自来水、蒸馏水冲洗干净，在95％乙醇中浸泡，擦干或烤干后使用。采血针用前必须消毒或用一次性针，避免交叉感染。
1.采血 用75％酒精棉球消毒手指，待干后右手持取血针、刺破皮肤，挤出血滴。薄、厚血膜可涂制在同一张玻片上（图6－5）。间日疟在发作后数小时采血可见红细胞各期。恶性疟在发作初期采血可见大量环状体，10天后可见配子体。巴贝虫病患者在发热时取血即可。鉴于微丝蚴的夜现周期性的特点，怀疑丝虫病患者可以在夜间取血检查。
图6－5 厚薄血膜制作
2.涂片 可涂制薄、厚两种血膜。
（1）薄血膜（thin blood film）：在载玻片1/3与2/3交界处蘸血一滴，以一端边缘光滑的载片为推片，将推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片边缘扩散后，自右向左推成薄血膜。操作时两载片间的角度为30°～45°，推动速度适宜。合格的薄血膜，在显微镜下观察应是一层均匀分布的血细胞，血细胞间无空隙且血膜末端呈舌形。
（2）厚血膜（thick blood film）：于载玻片的另一端（右）1/3处蘸血一小滴，以推片的一角，将血滴自内向外作螺旋形摊开，使之成为直径约1cm、厚薄均匀的血膜。厚血膜为多层血细胞的重叠，其一个视野等于20～25倍薄血膜的视野。
3.染色 采用瑞氏染色法（Wright's staining）：此法操作简便，适用于临床诊断。
三、排泄物、分泌物的检查
1.痰液 怀疑肺吸虫病、阿米巴病、棘球蚴病等者可以行痰液检查，痰液中也可能检出粪类圆线虫幼虫、蛔虫幼虫、钩虫幼虫等。
（1）肺吸虫卵等检查：可先用直接涂片法检查，如为阴性，改为浓集法，以提高检出率。(https://www.daowen.com)
1）直接涂片法：在洁净载玻片上先加1滴生理盐水，取痰液少许，以取铁锈色的痰为佳，涂成痰膜，加盖片镜检。如未发现肺吸虫卵，但见夏科－莱登晶体，疑似肺吸虫感染；多次涂片检查为阴性者，可改用浓集法。
2）浓集法：收集24h痰液，置于玻璃杯中，加入等量3％NaOH溶液消化，置37℃温箱内，数小时后痰液被消化成稀液状。分装于数个离心管内，以约400g离心5min，弃去上清液，取沉渣数滴涂片检查。
（2）溶组织内阿米巴滋养体检查：取新鲜痰液作涂片，高倍镜观察，如为阿米巴滋养体，可见伸出伪足并作定向运动。
（3）蛔虫幼虫、钩虫幼虫检查：一般以浓集法检出率比较高。
2.十二指肠液和胆汁 用十二指肠引流管抽取十二指肠液及胆汁（包括胆总管、胆囊及肝胆管3部分胆汁），以直接涂片法镜检；也可以经离心浓集后，取沉渣镜检。此法可检出蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、华支睾吸虫卵等。检查时，可将各部分十二指肠引流液分别滴于载玻片上，加盖片后直接镜检。为提高检出率，常将各部分引流液加生理盐水稀释搅拌后，分装于离心管内，以约400g离心5min，吸取沉渣涂片镜检。引流液也可以3％NaOH消化后再离心，检查沉淀，引流中的贾第虫滋养体常成聚集状。另外，肠检胶囊法（entero test）也可以应用于贾第虫病或华支睾吸虫病的诊断，其分为90cm儿童专用和140cm成人专用两种胶囊，胶囊中有20cm硅酮橡胶和缠于其上的70cm或120cm的尼龙线，胶囊上端有孔，患者温水送服有牵引线的胶囊直至十二指肠，留下10cm左右的线用胶布贴于患者脸颊或者颈部。4h后回收硅酮橡胶，显微镜检查染有胆汁或者黏液附着的末端，或者经过离心，取沉淀物镜检是否有虫卵或者滋养体等。相比十二指肠引流管获得十二指肠液及胆汁检查，患者依从性和配合比较好。
3.尿液 尿液中可查见阴道毛滴虫、丝虫微丝蚴、埃及血吸虫卵等。一般取尿液3～5ml，约400g离心5min后，取沉渣镜检。如果患者出现鞘膜积液，应在无菌条件下抽取鞘膜积液作直接涂片检查，也可以加适量生理盐水稀释后离心，取沉渣镜检，以发现丝虫微丝蚴等病原体。
4.阴道分泌物 主要用于阴道毛滴虫的检查。用消毒棉签在受检者阴道后穹窿、子宫颈及阴道壁上取分泌物，然后用生理盐水涂片法镜检，可检测到活动的虫体。
四、其他组织器官检查
1.骨髓穿刺液 骨髓穿刺液主要检查杜氏利什曼原虫无鞭毛体。一般常作髂前上棘穿刺。嘱患者侧卧，暴露髂骨部位。视年龄大小，选用17～20号带有针芯的干燥无菌穿刺针，从髂前上棘后约1cm处刺入皮下，当针尖触及骨面时，再慢慢地钻入骨内0.5～1cm拔出针芯，接一个2ml消毒注射器，抽取骨髓液。骨髓液涂片，甲醇固定，同检查瑞氏或吉姆萨染色，油镜检查。
2.淋巴结穿刺液
（1）利什曼原虫诊断：其检出率低于骨髓穿刺法，但方法简便、安全。对于经过治疗的患者，因其淋巴结内原虫消失较慢，故仍具有一定诊断价值。穿刺部位一般选腹股沟部淋巴结，少量淋巴结组织液滴于载玻片上，涂片、染色检查。
（2）丝虫成虫检查：可用注射器从可疑的肿大的淋巴结节中抽取成虫，或剖检摘除的结节寻找成虫。
3.肌肉组织
（1）怀疑感染了旋毛虫病的患者可以在发病10天以后对患者进行腓肠肌、肱二头肌或三角肌摘取0.2～0.5g肌肉组织，剪成小米粒大小，置于载玻片上，加1滴50％甘油溶液，用解剖针将肌肉撕碎，另覆盖1张载玻片，用手指轻压后低倍镜检查，发现旋毛虫幼虫即可确诊。为保证幼虫形态，活检的肌肉组织必须马上检查。
（2）并殖吸虫、裂头蚴、猪囊尾蚴检查用外科手术方法摘取的可疑结节，可以直接压片镜检。也可做病理切片检查。
4.皮肤及皮下组织
（1）怀疑皮肤及皮下组织囊尾蚴、裂头蚴、并殖吸虫寄生的可直接取组织活检。
（2）对于皮肤出现丘疹或结节等疑似皮肤型黑热病患者，可选择病变较明显之处，无菌条件下切取患处表面组织或刮取表面组织，涂片后用瑞氏染色或吉姆萨染色显微镜检查，如果没有发现病原体，可固定后，作组织切片检查。
5.黏膜组织
（1）怀疑日本血吸虫在感染者可以行直肠镜检查，发现病变部位可以钳取小肠黏膜进行活检。
（2）怀疑阿米巴病患者可做乙状结肠镜检查，发现溃疡和特征性病灶，可以钳取活检。
另外，在肠道组织黏膜活检时，可能发现相应的寄生虫病原体或病变组织，需要进行诊断和鉴别诊断。
6.角膜分泌物 将角膜标本和冲洗液镜检或者将角膜深部刮取物或活检的病变角膜制片可以确认是否是棘阿米巴感染。或者选择最佳的培养温度培养棘阿米巴。将角膜分泌物接种至含大肠埃希菌的无营养琼脂培养基上，平板置28～30℃培养，24h后，在倒置显微镜下直接观察有无滋养体；在2周内应每天用显微镜检查1次。一般经1～3天的培养可繁殖出大量的棘阿米巴。平板培养的棘阿米巴，在室温下可保存3个月或更长，而在4℃下则可保存6～12个月。
五、寄生虫的培养和动物接种
寄生虫的培养也是常用的寄生虫病原检测的手段，具有一系列的方法和技术，但是由于方法比较繁琐，不是常规实验室都能够开展的。但是一旦有需要可以咨询专门实验室和研究机构。可以进行培养而提高检出率的寄生虫一般包括钩虫、利什曼原虫、阿米巴原虫、阴道毛滴虫、刚地弓形虫、克氏锥虫等。另外，诸如利什曼原虫、刚地弓形虫、克氏锥虫等可以进行实验动物接种。一些寄生虫对一些动物敏感性是有选择性的。例如，不同品系的小鼠（mice）、豚鼠（guinea pig）和仓鼠（hamster）为常用的实验动物。可以收集可疑患者的可能含有病原体的样本。例如，血液、淋巴结穿刺液、脑脊液和骨髓进行敏感动物接种。一般以腹腔接种为多，经过一定的时间进行检测，如果阴性可以盲传数代，验证。而接种诊断法（xenodiagnosis）是一种用于诊断美洲锥虫病的方法，以人工饲养的未受感染的锥蝽幼虫吸食可疑患者的血液，一段时间后检查锥蝽粪便中内有无锥虫，而确定诊断。