血液原虫的检查技术
寄生在牛羊血液中的原虫如巴贝斯虫、泰勒虫、伊氏锥虫等，会大量破坏红细胞，使病畜出现高热稽留。实验室诊断时，一般在病畜高温时采取家畜血液，进行血液虫体的检查。常用的检查方法主要有血涂片染色观察、鲜血压滴的观察和虫体浓集法3种。
1.血涂片染色观察
病畜耳静脉采血、涂片，用姬姆萨或瑞氏染液染色后观察。
（1）血片的制作 消毒针头刺耳尖采集血液。取2片干燥洁净的载玻片，一为载片，一为推片。左手持一载片两端，右手持推片；取被检血1滴（注意：直接涂片时第1滴血不要）滴于载片一端，推片一端与血接触呈45°角，并使其血液自由沿推片边缘扩散，待均匀后，后拉推片3～5毫米，再以同等速度轻轻向载片另一端推动，将血均匀地涂抹在载片上，如图1-20所示。让血片自然干燥、待染，良好的血片以薄而均匀为宜，如图1-21所示。
图1-20 血片制作方法
图1-21 血片的比较
（2）固定 将已干燥的血片浸入甲醇中2～3分钟，取出晾干；或者在血片上滴加数滴甲醇使其作用2～3分钟，再自然挥发干燥。
注意
用姬姆萨染色法时血片要进行固定，而瑞氏染色法不用固定血片。
（3）染色
1）姬姆萨染色法。取已固定的血片，置于染色缸的染色架上，滴加姬姆萨染液至盖满整个血膜（约2毫升），根据室温高低和血片厚度，染色10～30分钟，用蒸馏水冲洗、干燥、镜检。
2）瑞氏染色法。取干燥血液涂片，置于染色缸的染色架上，滴加瑞氏染液于血片上，染液的量以刚覆盖血膜为宜。也可将血液涂片的血膜向下，滴加染液时由载玻片边缘浸入，以覆盖血膜（此法可避免颗粒状物沉于血膜上，而影响计数）。待染5～8分钟，再加等量的缓冲液，并轻轻摇动，使染液和缓冲液混匀。继续染色3～5分钟，再用蒸馏水冲洗，干燥后即可镜检。
（4）镜检 将血液涂片置于显微镜载物台上，用高倍镜观察，见红细胞变形、破裂，内有环形和卵圆形虫体（环形泰勒虫，见图1-22），或红细胞内有杆状和梨籽形虫体（瑟氏泰勒虫，见图1-23），或红细胞内有1个圆形虫体（山羊泰勒虫，见图1-24），或红细胞内有1～3个成双的梨籽形以尖端相连的呈锐角或钝角的虫体（双芽巴贝氏虫，见图1-25），即可确诊。
图1-22 血液中的环形泰勒虫
图1-23 血液中的瑟氏泰勒虫
图1-24 血液中的山羊泰勒虫(https://www.daowen.com)
图1-25 血液中的双芽巴贝氏虫
（5）注意事项
1）载玻片必须清洁干燥，最好用硫酸—重铬酸钾溶液浸泡洗净后，烘干备用。冬季或寒冷情况下，宜将载玻片烘热到40℃左右，干燥速度快，血细胞变形小，若不能立即检验，可用数滴甲醇加以固定。
2）姬姆萨染液的配制：姬姆萨染色粉0.5克、纯甘油（中性）33.0毫升、纯甲醇（中性）33.0毫升。
先将姬姆萨染色粉加入甘油内，置水浴（56～60℃）加温2小时，使染色粉溶解；再加入甲醇，混匀，保存于棕色瓶中。1周后，用滤纸滤过即成原液。
注意
姬姆萨原液中应绝对避免混入水分。
临用时，以清洁、干燥吸管吸取原液1毫升，加于蒸馏水10毫升中；或吸取原液1～2滴，加于蒸馏水1毫升中，配制成应用液使用。
3）本法所染血片，虫体呈蓝青色，组织细胞细胞质呈红色，细胞核呈蓝色，清晰鲜艳，各种白细胞易于辨别并适于血液原虫的检查。
染色良好的血片呈玫瑰红色。若呈灰色及青灰色，表示染色液过碱；呈鲜红色，则表示染色液过酸或染色时间过短。
2.鲜血压滴观察
主要是检查血液中虫体的运动性。将1滴生理盐水置于洁净的载玻片上，滴被检血液1滴充分与之混合后，盖上盖玻片，静置片刻，放显微镜下用低倍镜检查，发现有可疑虫体运动时，可再换高倍镜检查。由于虫体未染色，检查时应使视野中光线弱些。
提示
鲜血压滴观察仅适用于锥虫、微丝蚴的检查。
3.虫体浓集法
采病畜抗凝血6～7毫升，以500转/分钟离心5分钟，使其中大部分红细胞沉降；而后将含有少量红细胞、白细胞和虫体的上层血浆移入另一离心管中，补加一些生理盐水，再以2500转/分钟离心10分钟；弃去上清，取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色检查。
提示
虫体浓集法适用于伊氏锥虫、梨形虫和微丝蚴等的检查。
血液中微丝蚴的检查方法是采血于离心管中，加入5%醋酸溶液以使血液细胞溶解，待溶血完成后，离心并吸取沉淀物检查。
