粪便虫卵的检查技术
寄生于消化道及其相通器官(肝脏、胰脏等)中的寄生虫及某些呼吸道寄生虫,因为其虫卵或幼虫常随痰液咽下而随粪排出。故而寄生虫卵或幼虫的检查常通过采集粪便进行检查。
虫卵粪便检查法主要有3种,即直接涂片法、饱和盐水漂浮法和自然沉淀法,常用的是饱和盐水漂浮法。饱和盐水漂浮法的原理是用密度较虫卵大的饱和盐水作为漂浮液,使虫卵、球虫卵囊浮于液体表面,进行集中检查。漂浮法对于大多数较小的虫卵,如某些线虫卵、绦虫卵和球虫卵囊等有很高的检出率,但对密度较大的吸虫卵和棘头虫卵检出效果较差。这些虫卵的检查,需用沉淀法。
1.实验仪器与试剂
显微镜、小玻璃珠、量筒、食盐、常水、玻璃棒、载玻片、盖玻片、烧杯、试管、滴管、电炉、漏斗、显微镜、平皿、铜筛、纱布、接种棒(环)、锥形瓶、托盘天平、酒精灯、火柴等。
2.实验操作
(1)粪便的收集 供寄生虫学检查的粪便必须从直肠内采取,若亲眼看到家畜排粪,也可从地面收集粪样,并且要每头份采集3份样品,每份不少于60克。
直肠内样品应用大镊子手柄采集或用手指采集,放于有盖玻璃瓶或塑料袋内。
注意
容器内空气尽量排尽,以减少虫卵的发育和孵化。
(2)粪便检查
1)直接涂片法。取50%甘油水溶液或普通水1~2滴滴于载玻片上,镊取黄豆大小的被检粪块与之混匀,剔除粗粪渣,加上盖玻片,在显微镜下检查虫卵。
注意
直接涂片法操作最为简便,但检出率不高。
2)虫卵漂浮法。常用饱和盐水漂浮法,其操作步骤为:
①饱和盐水的制备。在水中加入足够的盐,煮沸后有结晶析出,即达饱和,一般1000毫升水中约加入食盐400克,用4层纱布或脱脂棉过滤,冷却后备用。
②蠕虫卵的漂浮。取5~10克粪便置于100~200毫升烧杯或塑料杯中,先加入少量漂浮液用玻璃棒充分搅开,再加入约20倍体积的漂浮液搅匀,用60目(孔径0.25毫米)铜筛过滤,滤液在烧杯中静置40分钟左右使虫卵上浮,用火焰消毒过的直径为0.5~1厘米的金属圈与液面平行蘸取表面液膜,将液膜抖落于洁净干燥的载玻片上,如此多次蘸取不同部位的液膜,加盖玻片镜检;或用盖玻片直接蘸取液面,放于载玻片上,在显微镜下检查。
③蠕虫卵的镜检。将覆盖有盖玻片的载玻片置于显微镜载物台上,在80~100倍的低倍镜下观察,查找虫卵,比照各种虫卵的标准形态,进行鉴定,如图1-26和图1-27所示。

图1-26 牛犊新蛔虫卵(https://www.daowen.com)

图1-27 肝片形吸虫卵
④注意事项。
a.本实验要采集新鲜粪便,并及时检查。
b.为了提高检出效果,还可用硫代硫酸钠、硝酸钠、硫酸镁、硝酸铵和硝酸铅等饱和溶液作为漂浮液,可大大提高检出效果,甚至可用于吸虫卵的检查,但易使虫卵和卵囊变形。因此,检查必须迅速,制片时可补加1滴水。
c.本实验主要用于检查线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊等密度较小的卵及卵囊。
提示
虫卵漂浮法操作较复杂,但检出率高。
3)虫卵沉淀法。
①自然沉淀法。取5~10克粪便捣碎后,放于一容器内,加5~10倍量清水搅匀,经40~60目(孔径0.25~0.38毫米)铜筛过滤后,让滤液自然沉淀约20分钟,倒掉上清液;如此反复2~3次,至上清液清亮为止,如图1-28所示。最后倾倒掉大部分上清液,留约沉淀物1/2的溶液量,用胶帽吸管吹吸混匀后,吸取少量于载玻片上,加盖玻片镜检,检查虫卵。
提示
自然沉淀法操作简便,费时较长,但检出率较高。

图1-28 自然沉淀法示意图
②离心沉淀法。取5~10克粪便捣碎后,放于一容器内,加5~10倍量清水搅匀,经40~60目铜筛过滤后在1000转/分钟的转速下离心5分钟,去上清液留沉淀物,加清水搅匀,再离心,如此反复2~3次。最后混匀取少量沉淀物涂片,加盖玻片镜检,查找虫卵。
提示
离心沉淀法操作较复杂,但节省时间,且检出率较高。