环状沉淀试验技术

四、环状沉淀试验技术

可溶性抗原（如细菌的内毒素、外毒素、菌体裂解液、病毒、组织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电解质存在的情况下，经过一定时间，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。沉淀试验分为液相沉淀试验和固相沉淀试验，环状沉淀试验为液相沉淀试验的一种。本试验是用小口径试管，在其中加入已知的沉淀素血清，然后沿管壁加入等量待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层，经数分钟后，两层液面交界处有白色沉淀环，称为环状沉淀试验。该试验主要用于抗原的定性检验。下面以诊断炭疽的Ascoli试验为例，介绍环状沉淀试验技术。

1.实验材料

炭疽沉淀素、炭疽标准抗原、炭疽病料组织、剪刀、研钵、定性滤纸、毛细管、生理盐水、沉淀反应管（小试管）、试管架、胶头滴管、水浴锅、电炉、离心机。

2.实验操作

1）待检抗原制备。取病畜病死组织1～2克，剪碎、捣烂，加5～10倍生理盐水，煮沸10～15分钟，冷却后用滤纸过滤或离心沉淀，透明滤液或离心的上清液即为被检抗原。

2）取沉淀反应管3支，分别编号为1、2、3号，并各加炭疽沉淀素血清0.1毫升。(https://www.daowen.com)

3）用毛细管吸取待检抗原0.1毫升，沿管壁轻轻加入1号管，使其重叠在炭疽沉淀素血清上，使上下两液间有一整齐界面。

4）另两支沉淀反应管，2号管加炭疽标准抗原，3号管加生理盐水作为对照，方法同上。

5）将反应管直立静置，1～15分钟内判定结果。若3号管无反应，而1、2号管两液的接触面出现白色的沉淀环，则判为阳性。

注意

肝脾、血液等制成的抗原多在1～5分钟内出现结果，而生皮病料抗原在10～15分钟内出现结果。