青光眼的免疫组织化学
从20世纪70年代起，免疫组织化学方法在敏感性和特异性方面就有了长足的发展，并逐渐形成标准化，大大地推动和影响着传统病理学方法的发展。免疫组织化学技术方法是将一些可视性物质如荧光素染料、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶等与组织和细胞中的特异性抗原相结合，使形态学观察向生理学和生物化学等领域扩展。实际工作中一般分为直接免疫组织化学方法和间接免疫组织化学方法。前者是用标记有可视性物质的特异性抗体来证实抗原的存在，而后者是用标记可视性物质的第二抗体来检测初级抗体一抗原反应复合物的存在。
免疫组织化学既可用于新鲜标本也可用于固定标本，但绝大多数抗体对新鲜标本的敏感性要大于固定标本，有些抗体甚至对固定标本不起反应。因此，病理和临床应当密切配合，才能增加诊断的精确性。
免疫组织化学方法在青光眼领域的应用已取得许多成果。有人应用通用型二步法免疫组化染色，观察开角型青光眼的Schlemm管外壁及深层巩膜，结果发现Schlemm管外壁较深层巩膜的胶原纤维束明显细小、不均匀，其排列方式也不同；Schlemm管外壁中有Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原，而无Ⅳ型胶原。因而认为Schlemm管外壁具有较好的抗变形力及柔韧性，其抗张强度虽不如巩膜，但比巩膜具有更好的顺应性，能够根据眼内压的波动表现出相应的回弹能力。
美国波特兰Devers眼科研究所的Wang L博士及其同事为了评估内皮素B受体（ETb R）在人青光眼视神经中的表达以及ETb R与星形细胞之间的空间关系，应用ETb R抗体对16名青光眼患者和10名正常对照者共26只眼进行了免疫组织化学染色，同时对组织进行ETbR和星形细胞双标。应用同样的技术在激光光凝固诱导局部退化的猴眼中对视神经进行研究。结果发现，人青光眼视神经中阳性ETb R免疫反应的频率高于年龄匹配的对照者。ETbR免疫反应性与星形细胞突起呈共定位，而且在青光眼中数量较高。在猴眼的退化区域内，与反应性星形细胞相关的ETbR增多，而且在正常区域与退化区域交界处表达最高。Wang博士等总结认为，受损视神经中ETb R免疫活性增高，而且与星形细胞存在相关性，这提示胶质一内皮素系统可能参与了神经元退化的病理机制。该研究支持临床上所观察到的内皮素参与青光眼的结果，并为内皮素系统与青光眼病理异常相关提供了直接证据。
国内有学者采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）方法，研究发现开角型青光眼患者外周血中IL-6、IL-12的含量显著减低。开角型青光眼患者机体内的细胞免疫水平不同于正常人，提示免疫因素可能在视神经损害机制中扮演重要角色。
还有人用免疫组织化学的方法观察视网膜IL-1β的表达及分布。显示IL-1β在正常眼内压视网膜轻度表达，在高眼内压视网膜表达显著增强。说明IL-1β参与了慢性高眼内压状态下大鼠视网膜及视网膜节细胞损伤的病理过程。(https://www.daowen.com)
在一项利用前房高眼内压灌注法获得的大鼠高眼内压的动物试验中，应用免疫组化和半定量RT-PCR方法检测大鼠视网膜组织中睫状神经营养因子CNTF m RNA的表达情况。结果显示，在正常大鼠视网膜组织中，CNTF m RNA有微量表达，急性高眼内压后，其表达明显增高，说明大鼠急性高眼内压损伤后，可通过内源性CNTF表达增加来应答视网膜神经节细胞（RGCs）及其他细胞的损伤，以保护视网膜及视神经，这为外源性营养因子的应用提供理论依据。
为了了解高眼内压对小梁细胞、内皮细胞白细胞黏附分子-1（ELAM-1）表达的影响，ELAM-l的表达与白介素-1a（IL-1a）是否有关，以期发现青光眼小梁细胞特异性表达ELAM-1的机制，有人使用流量恒定眼前节灌流培养猪眼动物模型，采用HE染色光镜观察不同眼内压下小梁网结构改变，免疫组化法检测小梁细胞ELAM-1的表达。研究发现，高眼内压可以诱导小梁细胞表达E.LAM-1，ELAM-1的表达可能与小梁网的自我代偿功能有关。
各型原发性青光眼患者接受小梁切除术后，取切取的小梁组织，行冰冻切片，进行针对水通道蛋白1（AQP1）的免疫组织化学染色，观察发现各型原发性青光眼组小梁网内皮细胞膜上均可见棕褐色染色颗粒汇集点，表示有AQP1表达，并显示在眼内压急剧升高的早期，机体能够通过某种机制自主上调小梁网内皮细胞膜AQP1的表达；而长期高眼内压时，小梁网AQP1的表达显著减少。
大量动物实验显示，高眼内压会损害视网膜的各层，这种损害不仅会影响到视网膜节细胞，同时也会影响到视网膜的其他非神经元类细胞。高眼内压状态下视网膜中IL-6表达增强，共聚物-1（Cop-1）能进一步增强IL-6的活性。IL-6通过IL-6受体（IL-6R）发挥其生物活性作用，促进神经元细胞存活，抑制神经元细胞的凋亡。Cop-1诱导的自体免疫反应可以对高眼内压状态下的视网膜起到保护作用。
随着医学科学技术的进步，免疫组织化学技术与方法正不断发展，必将在青光眼的病因、发病机制、诊断、治疗和预后等方面发挥更为重要的作用。
（刘建君）