5.1 Egr通过两条不同的通路诱导细胞死亡
肿瘤坏死因子（TNF）在调控细胞增殖、分化、生存及免疫等方面扮演重要角色[110，111]。在果蝇眼部过表达TNF的同源物Egr能够诱导细胞死亡并产生小眼表型[60，61]（图5-1 B），这依赖于JNK信号通路，因为阻断JNK能够抑制这种小眼表型，但研究人员对于这种死亡是否依赖于胱冬裂酶（caspase）参与仍存在着争议[60，61]。
除了Egr能够诱导细胞死亡外，在眼部过表达持续活化型的JNK上游激酶Hep（Hep CA）同样能诱导JNK依赖的细胞死亡并产生小眼表型（图5-1 H）。首先为了验证caspase是否参与了Egr-JNK信号通路诱导的细胞死亡，我们检测了下调caspase通路活性对GMR＞Egr及GMR＞Hep CA小眼表型的影响。染色体缺失品系Df（3L）H99（简称为H99）同时删除了包括reaper（rpr），head involution defective（hid）及grim在内的3个促细胞凋亡基因，DIAP1（Drosophila inhibitor of apoptosis protein 1）编码果蝇体内抑制细胞凋亡的蛋白[112]，DRONC（Drosophila Nedd-2-like caspase）为果蝇中caspase-9的同源物。
图5-1 Egr诱导JNK非依赖的细胞死亡途径
（A—I）光学显微镜果蝇成虫眼部图片。与对照相比（A，GMR-Gal4/+），GMR＞Egr诱导的小眼表型（B，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+）可被缺失rpr，hid和grim（C，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/Df（3L）H99），过表达DIAP1（D，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/UAS-DIAP1），过表达负显型的DRONC（E，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/UAS-DRONCDN）部分抑制。而GMR＞Hep CA诱导的小眼表型（F，GMR-Gal4 UAS-Hep CA/+）却不能被缺失rpr，hid和grim（G，GMR-Gal4 UAS-Hep CA/Df（3L）H99），过表达DIAP1（H，GMR-Gal4 UASHep CA/UAS-DIAP1），过表达负显型的DRONC（I，GMR-Gal4 UAS-Hep CA/UASDRONCDN）所抑制。
（J—M）光学显微镜3龄幼虫眼成虫盘X-Gal染色图片。眼成虫盘中过表达Egr能够激活hid（J，GMR-Gal4 UAS-Egr/W05014）以及rpr（K，rpr-lacZ/+；GMR-Gal4 UAS-Egr/+）的转录。过表达Hep CA不能激活hid（L，GMR-Gal4 UAS-Hep CA/W05014）以及rpr（M，rprlacZ/+；GMR-Gal4 UAS-Egr/+）的转录。(https://www.daowen.com)
我们发现Egr引起的小眼表型能够被H99，过表达DIAP1或过表达负显型（dominant negative）的DRONC所抑制（图5-1 B—E），而Hep CA引起的小眼表型则不能（图5-1 F—I）。此外，与此相符的是我们发现过表达Egr能够激活hid及rpr的转录（图5-1 J—K），过表达Hep CA却不能（图5-1 L—M）。我们进一步发现Egr对于rpr的激活在d TAK1纯和突变体及过表达Puc的情况下仍然可被检测到（图5-2 F—H），表明JNK信号通路对于Egr诱导的rpr活化并非必需。最后我们的实验证据还显示Egr引起的细胞死亡并不完全依赖于JNK通路，因为这个小眼表型并不能被d TRAF2，d TAK1纯和突变或过表达Puc及负显型Bsk（Bsk DN）完全抑制（图5-2 A—E），进一步证明d TRAF2-d TAK1-Hep-Bsk通路并不是Egr下游唯一的细胞死亡调节信号。
图5-2 Egr诱导JNK非依赖的细胞死亡及rpr激活
（A—E）光学显微镜果蝇成虫眼部图片。在眼部很强的表达Egr（Egr KB）诱发的小眼表型（A，GMR-Gal4 UAS-Egr KB/+）不能被d TRAF2纯和突变（B，d TRAF2EX1.1/Y；GMR-Gal4 UAS-Egr KB/+），d TAK1的纯和突变（C，d TAK11/Y；GMR-Gal4UASEgr KB/+），过表达负显型Bsk（D，GMR-Gal4 UAS-Egr KB/UAS-Bsk DN）或过表达Puc（E，GMR-Gal4 UAS-Egr KB/UAS-Puc）完全抑制。
（F—I）光学显微镜3龄幼虫眼成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（F，GMR-Gal4/+；rpr-LacZ/+），Egr诱导的rpr激活（G，GMR-Gal4 UAS-Egr/+；rpr-LacZ/+）不能被d TAK1纯和突变（H，d TAK11/Y；GMR-Gal4 UAS-Egr/+；rpr-LacZ/+）或过表达Puc（I，GMR-Gal4 UAS-Egr/+；rpr-LacZ/UAS-Puc）所抑制。
综合以上实验结果，我们认为Egr下游存在着两条独立的通路，一条是JNK信号通路依赖的，而另外一条则是caspase依赖的。