5.2　nopo对于Egr诱导的细胞死亡是必需的

图5-3　NOPO调控Egr诱导的细胞死亡

（A）nopo附近基因及示意图。P因子5-SZ-3004及3个染色体缺失片段Df（2R）ED3485，Df（2R）Exel7153和Df（2R）BSC33被分别标出。
（B—H）光学显微镜果蝇成虫眼部图片。与对照相比（B，GMR-Gal4/+），在眼部过表达Egr产生的小眼表型（C，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+）不能被染色体缺失片段Df（2R）ED3485抑制（D，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/Df（2R）ED3485），可以被Df（2R）Exel7153（E，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/Df（2R）Exel7153），Df（2R）BSC 33（F，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/Df（2R）Exel7153）及nopo的突变体（G，UAS-Egr/nopo5-SZ-3004；GMR-Gal4/+）和nopo RNAi（H，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/UAS-nopo-IR）部分抑制。
（I—K）光学显微镜果蝇成体翅膀图片。与对照相比（I，ptc-Gal4/+），Egr过表达引起的翅脉丢失表型（J，ptc-Gal4 UAS-Egr/+）可被nopo的RNAi抑制（K，ptc-Gal4 UAS-Egr/UAS-nopo-IR）。(https://www.daowen.com)

我们利用染色体缺失片段对GMR＞Egr小眼表型进行了遗传筛选，并把一个抑制基因定位在2号染色体右臂的55B12与55C1之间，这个区域被两个缺失片段Df（2R）Exel7153与Df（2R）BSC337同时覆盖（图5-3 A），这两个缺失片段都可以微弱地抑制GMR＞Egr诱导的小眼表型（图5-3 E—F），而缺失其相邻片段却不能产生抑制效果（图5-3 D），表明该区域中存在着调控基因。在对该区域分析后发现其总共包括了6个基因，其中包括nopo，它编码了果蝇中TRIP这一E3泛素连接酶的同源物[66]。我们进一步发现突变内源性的nopo或者表达nopo的RNAi都能部分抑制GMR＞Egr的小眼表型（图5-3 G，H），却不能抑制GMR＞Hep CA引起的细胞死亡（未显示），证明nopo对于Egr诱导的细胞死亡调控是位于Hep上游或与其平行。

接着我们又在果蝇翅膀中进一步验证了nopo与Egr的遗传学关系。在ptc启动子驱使下沿着翅成虫盘前后轴过表达Egr能够产生成虫翅缺口表型（图5-3 I，J），该表型同样可以被nopo的下调抑制（图5-3 K）。以上实验结果表明nopo对于Egr诱导的细胞死亡是必需的。