5.3　NOPO诱导caspase介导的JNK信号非依赖的细胞死亡

为了进一步研究NOPO如何调控Egr诱导的细胞死亡，我们在眼或翅成虫盘中特异性地表达了NOPO，GMR＞NOPO表现出粗糙的小眼表型（图5-4 A，B），而我们用吖啶橙（acridine orange，AO）染色的结果显示这个表型可能是由于细胞死亡导致的，因为在形态发生沟后部出现了大量的细胞死亡（图5-4 C，D）。此外，我们用翅膀特异的scalloped-Gal4（sd-Gal4）表达NOPO也得到了类似的结果，AO染色的结果证明在翅膀中NOPO过表达同样促进细胞死亡的发生（图5-4 G，H），导致成虫翅膀变小并且出现边缘翅脉丢失的表型（图5-4 E，F）。

图5-4　过表达NOPO诱导caspase介导的，JNK非依赖的细胞死亡（见彩图5）(https://www.daowen.com)

（A—H）过表达NOPO促进细胞死亡。与对照的果蝇成虫眼睛（A，GMR-Gal4/+）或翅膀（E，sd-Gal4/+）相比，用GMR-Gal4或sd-Gal4过表达NOPO会分别导致粗糙小眼（B，UASNOPO/+；GMR-Gal4/+）和翅膀变小及翅脉边缘丢失的表型（F，sd-Gla4/UAS-NOPO）。同时也会诱导发育过程中眼成虫盘（C，GMR-Gal4/+.D，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/+）以及翅成虫盘（G，sd-Gal4/+.H，sd-Gla4/UAS-NOPO）大量细胞死亡。
（I—P）光学显微镜果蝇成虫眼部图片。GMR＞NOPO诱导的眼部表型不能被过表达d TAK1的负显型（I，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-d TAK1DN），hep的RNAi（J，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-hep-IR），Bsk的负显型（K，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UASBsk DN）或Puc（L，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-Puc）抑制；但却可以被过表达DIAP1（M，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-DIAP1），负显型的DRONC（N，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-DRONCDN），p35（O，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/UAS-p35）或H99（P，UAS-NOPO/+；GMR-Gal4/Df（3L）H99）抑制。
（Q—T）光学显微镜3龄幼虫眼成虫盘和翅成虫盘X-Gal染色图片。过表达NOPO能够激活rpr及hid在体内的转录。基因型：Q，rpr-lacZ/+；GMR-Gal4/+.R，UAS-NOPO/+；rprlacZ/+；GMR-Gal4/+.S，sd-Gal4/W05014.T，UAS-NOPO/+；sd-Gal4/W05014。

然后我们利用GMR＞NOPO产生的小眼表型研究NOPO与Egr下游两条调控细胞死亡的信号通路（JNK和caspase）之间的遗传学关系。我们发现GMR＞NOPO表型不能被过表达d TAK1DN，hep RNAi，Bsk DN或Puc所抑制（图5-4 I—L）。相反地，这个表型可以被下调caspase活性很好地抑制，包括过表达能抑制起始caspase活性的DIAP1，DORNCDN或能够抑制效应caspase的p35（图5-4 M—O）。