6.2 Src42A通过Ben/dUev1a调控JNK介导的细胞迁移
为了进一步研究Src42A在调控细胞迁移方面的作用，我们沿着成虫盘前后轴过表达Src42A，发现导致很强的细胞迁移表型及MMP1的大量表达（图6-2 B）。为了验证这种迁移的确是由于Src的活化而并非其细胞死亡所致，我们在表达Src42A的同时过表达p35来抑制细胞凋亡的发生，结果发现过表达p35不会抑制迁移的发生，这些“不死”的细胞仍会向成虫盘后部迁移（图6-2 D‴），同时会导致ptc表达区域的增宽及MMP1表达的加强（图6-2 D），表明这种细胞迁移是由于Src活化而直接导致，并非细胞死亡产生的次生结果。
图6-1 Src42A调控lgl-Ras协同作用及scrib缺失引起的细胞迁移（见彩图6）
（A—C）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘及腹部神经节（VNC）图片，GFP标记克隆。Ras V12/lgl-/-诱导的肿瘤细胞侵袭（A′）可以被过表达Puc（B′）或下调src42A（C′）抑制。
（D—F）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体免疫染色图片。与对照相比（D，ptc-Gal4 UAS-GFP/+），沿着翅成虫盘前后轴过表达scrib RNAi产生的细胞迁移及MMP1的激活表型（E，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-scrib-IR）可以被src42A下调（F，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-scrib-IR；UAS-src42A-IR/+）抑制。
（A，A′）y w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-RasV12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/+（B，B′）y w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UASRas V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-Puc（C，C′）y w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-RasV12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-src42A-IR。
图6-2 Src42A过表达诱导JNK依赖的细胞迁移（见彩图7）
（A—C）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体免疫染色图片。与对照相比（D，ptc-Gal4 UAS-GFP/+），沿着翅成虫盘前后轴过表达Src42A产生的细胞迁移及MMP1的激活表型（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Src42A/+）可以被过表达Bsk DN下调（F，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Src42A/UAS-Bsk DN）抑制。同时表达Src42A以及p35导致ptc表达区域增宽，MMP1表达量增加，并伴随细胞向后部的迁移（D，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Src42A/UAS-p35）。
JNK信号通路的紊乱与癌症发生密切相关，其活化会促进多种果蝇肿瘤模型中细胞迁移的发生[107，125-127]。我们发现ptc＞Src42A诱导的迁移表型可以被过表达Bsk的负显型很好地抑制（图6-2 C），表明Src42A的迁移表型需要JNK信号。接下来我们对Src42A与JNK信号通路成员做了遗传学上位性分析（epistasis analysis），发现ptc＞Src42A迁移表型能够被下调Hep，d TAK1，以及d TRAF2所抑制（图6-3 C）。(https://www.daowen.com)
图6-3 Src42A通过Ben/dUev1a诱导JNK依赖的细胞迁移（见彩图8）
（A—B）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体免疫染色图片。过表达Src42A诱导的细胞迁移及MMP1激活（A，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Src42A/+）能够被同时下调ben和d Uev1a表达所抑制（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Src42A/UAS-ben-IR，UAS-d Uev1a-IR）。（C）Src42A诱导细胞迁移数据统计图。P值由t检验算出，表示平均值+S.D.，n＞30，（***P＜0.001，**P＜0.01）。
而我们前面研究表明Ben/d Uev1a E2复合物调控了果蝇体内JNK信号通路介导的细胞迁移及死亡。于是我们检测了Ben/d Uev1a与Src42A之间的关系，结果显示Src42A过表达引起的迁移及MMP1表达都能够被下调ben，d Uev1a或同时下调两者所抑制（图6-3 B，C）。我们前面结果显示Ben/d Uev1a的表达能够激活JNK下游报告基因puc的转录（图4-8 C），与此相符的是，我们发现沿着前后轴过表达Ben/d Uev1a能够产生微弱的细胞迁移表型，并激活MMP1表达（图6-4 B，D），而在此基础上去掉一份内源性的puc则能够进一步增强迁移表型（图6-4 C），表明Ben/d Uev1a能够激活JNK依赖的细胞迁移发生。
图6-4 Ben/dUev1a过表达能促进RasV12细胞增殖并产生迁移（见彩图9）
（A—D）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体免疫染色图片。与对照相比（A，ptc-Gal4 UASGFP/+），过表达Ben/dUev1a产生的迁移表型（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Ben T8；UASdUev1a/+）可被puc的突变体增强（C，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Ben T8；UAS-dUev1a/pucE69）。
（E—G）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘及腹部神经节（VNC）图片，GFP标记克隆。Ras V12过表达克隆可微弱的诱导生长（E），但不会迁移到NVC（E′）；过表达Ben和d Uev1a的克隆既不会增殖（F）也不会产生迁移（F′）；当Ben和d Uev1a与Ras V12同时表达时，不但能够诱导肿瘤产生（G），并且肿瘤细胞会向VNC迁移（G′）。
（E）ey-Flp，Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/+；UAS-Ras V12/+。
（F）ey-Flp，Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-Ben T8；UAS-d Uev1a/+。
（G）ey-Flp，Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-Ben T8；UAS-Ras V12/UAS-d Uev1a。
以上实验结果表明Ben/d Uev1a对于Src42A诱导的，JNK依赖的细胞迁移发生既是必需的也是充分的。