10.5　Wnd激活JNK依赖的细胞迁移

JNK信号通路能够通过激活MMP1的表达调控肿瘤细胞的迁移与侵袭，而Wnd过表达能够诱导MMP1活化及迁移发生，因此提示我们可能Wnd通过激活JNK信号通路促进了迁移的发生。为验证这个假说，我们首先检测了puc这一JNK信号通路报告基因的表达情况。我们发现一方面下调wnd的表达能够抑制过表达Rho1引起的puc激活（图10-2 I—K）；另一方面过表达Wnd则能够在翅成虫盘中激活puc的转录（图10-5 A，B）。此外，我们发现过表达Wnd也能上调体内JNK磷酸化水平（图10-5 K），充分证明Wnd能够激活JNK信号通路。与前面结果相符的是，过表达Wnd KD同样不能激活JNK（图10-5 C）。为了进一步研究Wnd诱导的EMT表型与JNK通路之间的遗传学上下游关系，我们进行了上位性分析。结果显示Wnd引起的细胞迁移、MMP1激活以及E-cad的降低都能被下调Bsk抑制（图10-5 D—E，G—H）。有趣的是，我们发现Wnd诱导的肌动蛋白聚集表型却不能被过表达Bsk DN所抑制（图10-5 F，I），这与前面我们的实验结果相符，表明Rho1-Wnd能够激活JNK信号通路非依赖的细胞骨架重塑过程。

图10-5　Wnd通过Hep-MKK4诱导细胞迁移（见彩图32）(https://www.daowen.com)

（A—C）光学显微镜3龄幼虫翅成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（A，ptc-Gal4 UASGFP/+；puc E69/+），过表达Wnd能够激活puc转录（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Wnd；puc E69/tub-Gal80ts），而过表达Wnd KD则不能（C，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Wnd KD；puc E69/+）。
（D—L）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体染色图片。Wnd过表达引起的细胞迁移、MMP1激活（D，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Wnd；tub-Gal80ts/+）及E-cad的降低（E）可被过表达Bsk DN抑制（G，H，ptc-Gal4 UAS-GFP/UAS-Wnd；tub-Gal80ts/UAS-Bsk DN），而Wnd引起的肌动蛋白上调（F）却不会受Bsk DN过表达影响（I）。Wnd过表达引起的迁移表型及JNK磷酸化激活也能被同时下调hep以及mkk4表达所抑制（J，L，ptc-Gal4 UAS-GFP/UASWnd UAS-mkk4-IR；tub-Gal80ts/UAS-hep-IR）。

在果蝇中存在两个JNK激酶，分别为Hep以及MKK4（MAP kinase kinase 4）。Hep调控了背部闭合、形态发生及肿瘤细胞迁移[17，80，175]；而MKK4则调控了Egr诱导的细胞死亡[81]。我们发现尽管单独下调hep或者mkk4能够抑制Wnd过表达引起的小眼表型（第9章），但却不能明显抑制Wnd引起的迁移表型（未显示），而同时下调hep与mkk4则能够显著抑制Wnd诱导的迁移及MMP1激活（10.5 J），同时也抑制了Wnd引起的JNK磷酸化上调（图10-5 L）。以上结果表明Rho1-Wnd通过Hep及MKK4激活了JNK信号通路介导的细胞迁移。