10.2　Rho1通过Wnd诱导细胞迁移

Rho1属于GTPase家族成员，参与着包括细胞凋亡、增殖等生理活动。最近研究表明Rho1诱导JNK信号通路介导的细胞凋亡及补偿性增殖[158，159]，与此相符的是，我们发现过表达Rho1能够很强地激活JNK下游报告基因puc转录（图10-2 J）并引起大量细胞死亡（图10-2 L）。除此以外，我们观察到用ptc-Gal4过表达Rho1还能够产生很强的细胞迁移表型并激活MMP1的表达（图10-2 B），并且这种细胞迁移不依赖于它促进细胞凋亡的功能，因为过表达p35非但不能抑制该表型，反而能进一步加强MMP1激活及增殖（图10-2 D）。

尽管我们前面实验证据表明wnd调控了果蝇体内JNK介导的细胞死亡（详见第9章），但对于Wnd能否调控细胞迁移仍不明了。我们进一步的研究发现除了能够抑制Src42A引起的细胞迁移外，wnd下调还能够抑制Rho1过表达引起的迁移表型及MMP1激活（图10-2 C）。此外，我们发现Rho1过表达能够引起肌动蛋白（actin）的重塑，而这也是上皮间质转化（EMT）过程的重要标志之一[141]。同样的，这种Rho1诱导的actin的聚集也依赖于wnd的活化（图10-2 G）；而有趣的是，我们发现过表达Bsk DN却不能抑制该表型（图10-2 G），尽管它能够完全抑制Rho1引起的细胞迁移及MMP1激活（未显示），表明Rho1-Wnd通过JNK非依赖的途径调节了细胞骨架的重塑过程。

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图10-2　Wnd调控Rho1过表达诱导的细胞迁移（见彩图29）

（A—D）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘MMP1抗体染色图片。Rho1过表达引起的细胞迁移及MMP1激活（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/+）可被下调wnd（C，ptc-Gal4 UASGFP/+；UAS-Rho1/UAS-wnd-IR）抑制，而不会因细胞凋亡的抑制而改变（D，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-p35）。
（E—H）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘phalloidin染色图片。与对照相比（E，ptc-Gal4 UASGFP/+），过表达Rho1引起的actin聚集表型（F，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/+）能够被wnd RNAi部分抑制（G，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-wnd-IR），却不会被过表达Bsk DN抑制（H，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-Bsk DN）。
（I—K）光学显微镜3龄幼虫翅成虫盘X-Gal染色图片。过表达Rho1激活的puc转录（J，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/puc E69）能够被下调wnd部分抑制（K，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1 UAS-wnd-IR/puc E69）。
（L—M）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘AO染色图片。过表达Rho1引起的细胞死亡（L，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/+）能够被下调wnd部分抑制（M，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-wnd-IR）。