一 母种生产
1.常用的斜面母种培养基配方
（1）食用菌常用培养基
1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）配方：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂18～20g，水1000mL。
2）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）配方：马铃薯（去皮）200g，蔗糖20g，琼脂18～20g，水1000mL。
3）马铃薯葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配方：马铃薯（去皮）200g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。
4）马铃薯麦芽糖琼脂培养基配方：马铃薯（去皮）300g，麦芽糖10g，琼脂18～20g，水1000mL。
5）马铃薯综合培养基配方：马铃薯（去皮）200g，磷酸二氢钾3g，维生素B12～4片，葡萄糖20g，硫酸镁1.5g，琼脂20g，水1000mL。
（2）木腐菌种培养基
1）麦芽浸膏10g，酵母浸膏0.5g，硫酸镁0.5g，硝酸钙0.5g，蛋白胨1.5g，麦芽糖5g，磷酸二氢钾0.25g，琼脂20g，水1000mL。
2）麦芽浸膏10g，硫酸铁0.1g，硫酸镁0.1g，琼脂20g，磷酸铵1g，硝酸铵1g，硫酸锰0.05g，水1000mL。
3）酵母浸膏15g，磷酸二氢钾1g，硫酸钠2g，蔗糖10～40g，麦芽浸膏10g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.05g，硫酸铁0.01g，琼脂15～25g，水1000mL。
4）酵母浸膏2g，蛋白胨10g，硫酸镁0.5g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg，琼脂20g，水1000mL。
（3）保藏菌种培养基
1）玉米粉酵母膏葡萄糖琼脂培养基配方：玉米粉50g，葡萄糖10g，酵母膏10g，琼脂15g，水1000mL。
2）玉米粉琼脂培养基配方：玉米粉30g，琼脂20g，水1000mL。
3）蛋白胨酵母膏葡萄糖培养基配方：蛋白胨10g，葡萄糖1g，酵母膏5g，琼脂20g，水1000mL。
4）完全培养基配方：硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.5g，蛋白胨2g，琼脂15g，水1000mL。
2.母种培养基的配制
（1）材料准备 选取无芽、无变色的马铃薯，洗净去皮，称取200g，切成1cm左右的小块。同时准确称取好其他材料。酵母粉用少量温水溶化。
（2）热浸提 将切好的马铃薯小块放入1000mL水中，煮沸后用文火保持30min。
（3）过滤 煮沸30min后用4层纱布过滤。
（4）琼脂溶化 若使用琼脂粉应事先溶于少量温水中，然后倒入培养基浸出液中溶化。若使用琼脂条可先剪成2cm长的小段，用清水漂洗2次后除去杂质。煮琼脂时要多搅拌，直至完全溶化。
（5）定容 琼脂完全溶化后，将各种材料全部加入液体中，不足时加水定容至1000mL，搅拌均匀。
（6）调节pH 定容后，用pH试纸测定培养基的pH。当pH偏高时，可用柠檬酸或醋酸下调；当pH偏低时，可用氢氧化钠、碳酸钠或石灰水调高。
（7）分装 选用洁净、完整、无损的玻璃试管，调节好pH后进行分装。分装装置可用带铁环和漏斗的分装架或灌肠桶。分装时，试管要垂直于桌面。
【注意】 不要使培养基残留在近试管口的壁上，以免日后污染，一般培养基装量为试管长度的1/5～1/4。
分装完毕后，塞上棉塞，棉塞选用干净的梳棉制作，不能使用脱脂棉。棉塞长度为3～3.5cm，塞入管内1.5～2cm，外露部分1.5cm左右，松紧要适度，以手提外露棉塞试管不脱落为度。然后将7支捆成一捆，用双层牛皮纸将试管口一端包好扎紧。(https://www.daowen.com)
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（8）灭菌 灭菌前，先检查锅内水分是否足量，如果水分不足，要先加足水分，然后将分装包扎好的试管直立放入灭菌锅套桶中，盖上锅盖，对角拧紧螺栓，关闭放气阀，开始加热。严格按照灭菌锅使用说明进行操作，在0.11～0.12MPa压力下保持30min。
（9）摆斜面 待压力自然降压至0MPa时，打开锅盖，一般情况下，高温季节打开锅盖后自然降温30～40min，低温季节自然降温20min后再摆放斜面。如果立即摆放斜面，由于温差过大，试管内易产生过多的冷凝水。斜面长度以斜面顶端距离棉塞40～50mm为标准。
斜面摆放好后，在培养基凝固前，不宜再行摆动。为防止斜面凝固过快，在斜面上方试管壁形成冷凝水，一般在摆好的试管上覆盖一层棉被，低温季节这项工作尤其重要。
（10）无菌检查 灭菌后的斜面培养基应进行无菌检查。母种培养基随机抽取3%～5%的试管，置于28℃恒温培养箱中48h后检查，无任何微生物长出的为灭菌合格，即可使用。
3.母种接种
（1）接种前准备
1）接种前，工作人员穿好工作服，戴好口罩、工作帽，必须彻底清理打扫接种室（箱），经喷雾及熏蒸消毒，使其成为无菌状态。
2）清洗干净接种工具，一般为金属的针、刀、耙、铲、钩。
3）用肥皂水洗手，擦干后再用70%～75%酒精棉球擦拭双手、菌种试管及一切接种用具。
4）可事先在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期等。
5）将接种所需物品移入超净工作台（接种箱），按工作顺序放好，检查是否齐全，并用5%石炭酸溶液重点在工作台上方附近的地面上喷雾消毒，打开紫外线灯照射灭菌30min。
（2）接种
1）关闭紫外灯（若需开日光灯，需间隔20min以上），用75%酒精棉球擦拭双手和母种外壁，并点燃酒精灯，因为火焰周围10cm的区域为无菌区，在无菌区接种可以避免杂菌污染。
2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间的部分，斜面向上并使它处于水平位置，先将棉塞用右手拧转松动，以利于接种时拔出。
3）右手拿接种钩，在火焰上方将工具灼烧灭菌，凡在接种时可进入试管部分，都用火焰灼烧灭菌，操作时要使试管口靠近酒精灯火焰。
4）用右手小拇指、无名指、中指同时拔掉两支试管的棉塞，并用手指夹紧，用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口，以杀灭试管口可能沾染上的杂菌。
5）将烧过并经冷却后的接种钩伸入菌种管内，去除上部老化、干瘪的菌丝块，然后取0.5cm×0.5cm大小的菌块，迅速将接种钩抽出试管，注意不要使接种钩碰到管壁。
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6）在火焰旁迅速将接种钩伸进待接种试管，将挑取的菌块放在斜面培养基的中央。注意不要把培养基划破，也不要使菌种沾在管壁上。
7）抽出接种钩，灼烧管口和棉塞，并在火焰旁将棉塞塞上。每接3～5支试管，要将接种钩在火焰上再灼烧灭菌，以防大面积污染。
4.培养
（1）恒温培养 接种完毕，将接好的试管菌种放入22～24℃恒温培养箱中培养。
（2）污染检查 在菌种培养过程中，接种后2天内要检查接种后杂菌污染情况，在试管斜面培养基上发现如果有绿色、黄色、黑色等，不是白色、生长整齐一致的斑点、块状杂菌，应立即剔除。以后每2天检查1次。挑选出菌丝生长致密、洁白、健壮，无任何杂菌感染的试管菌种，放于2～4℃的冰箱中保存。
