原种、栽培种生产
1.常见培养基及制作
（1）以棉籽壳为主料培养基
1）棉籽壳培养基配方：
①棉籽壳99%，石膏1%，含水量60%±2%。
②棉籽壳84%～89%，麦麸10%～15%，石膏1%，含水量60%±2%。
③棉籽壳54%～69%，玉米芯20%～30%，麦麸10%～15%，石膏1%，含水量60%±2%。
④棉籽壳54%～69%，阔叶木屑20%～30%，麦麸10%～15%，石膏1%，含水量60%±2%。
2）棉籽壳培养基制作：先按配方的比例计算出需要的原料的量，称取原料。将糖溶于适量水中加入，再加入适量的水。适宜含水量的简便检验方法是用手抓一把加水拌匀后的培养料紧握，当指缝间有水但不滴下时，料内的含水量为适度。
（2）以木屑为主料培养基
1）木屑培养基配方：
①阔叶树木屑78%，麸皮或米糠20%，蔗糖1%，石膏1%，含水量58%±2%。
②阔叶树木屑63%，棉籽壳15%，麸皮20%，糖1%，石膏1%，含水量58%±2%。
③阔叶树木屑63%，玉米芯粉15%，麸皮20%，糖l%，石膏1%，含水量58%±2%。
2）木屑培养基制作：方法同棉籽壳培养基。
（3）谷粒培养基
1）谷粒培养基配方：小麦93%，杂木屑5%，石灰或石膏粉2%。
2）谷粒培养基制作：小麦过筛，除去杂物，再放入石灰水中浸泡，使其吸足水分，捞出后放入锅中用水煮至麦粒无白心为止（吸足水分）。趁热摊开，凉至麦粒表面无水膜（用手抓麦粒不黏手），加入石膏拌匀，然后装瓶、灭菌。
（4）木块木条培养基
1）木块木条培养基配方：
①木条培养基：木条85%，木屑培养基15%。常用于塑料袋制栽培种，故通常称为木签菌种。
②楔形和圆柱形木块培养基：木块84%，阔叶树木屑13%，麸皮或米糠2.8%，白糖0.1%，石膏粉0.1%。
③枝条培养基：枝条80%，麸皮或米糠19.9%，石膏粉0.1%。
2）木块木条培养基制作：
①木条培养基制作：先将木条在0.1%多菌灵液中浸0.5h，捞起稍沥水后即放入木屑培养基中翻拌，使其均匀地粘上一些木屑培养基即可装瓶。装瓶时尖头要朝下，最后在上面铺约1.5cm厚的木屑培养基即可。
②楔形和圆柱形木块培养基制作：先将木块浸泡12h，将木屑按常规木屑培养料的制作方法调配好，然后将木块倒入木屑培养基中拌匀、装瓶，最后再在木块面上盖一薄层木屑培养基按平即可。
③枝条培养基制作：选1～2年生、粗8～12mm的板栗、麻栎和梧桐等适生树种的枝条，先劈成两半，再剪成约35mm长、一头尖一头平的小段，投入40～50℃的营养液中浸1h，捞出沥去多余水分，与麸皮或米糠混匀，再用滤出的营养液调节含水量后加入石膏粉拌匀，即可装瓶、灭菌。其中营养液配方为：蔗糖1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%，混匀后溶于水即可。
2.培养基灭菌
（1）高压灭菌 木屑培养基和草料培养基在0.12MPa条件下灭菌1.5h或0.14～0.15MPa下1h；谷粒培养基、粪草培养基和种木培养基在0.14～0.15MPa条件下灭菌2.5h。装容量较大时，灭菌时间要适当延长。
灭菌完毕后，应自然降压至0MPa，不应强制降压。
（2）常压灭菌 常压灭菌是采用常压灭菌锅进行蒸汽灭菌的方法。锅内的水保持沸腾状态时的蒸汽温度一般可达100～108℃，灭菌时间以袋内温度达到100℃以上开始计时。常压灭菌要在3h之内使灭菌室温度达到100℃，在100℃下保持10～12h，然后停火闷锅8～10h后出锅。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培养基和种木培养基，应高压灭菌，不应常压灭菌。常压灭菌操作要点如下。
1）迅速装料，及时进灶。如果不能及时装料和进灶灭菌，料中存在的酵母菌、细菌、真菌等竞争性杂菌遇适宜条件迅速增殖，尤其是在高温季节，如果装料时间过长，酵母菌、细菌等将基质分解，容易引起培养料的酸败，使灭菌不彻底。(https://www.daowen.com)
2）菌种袋应分层放置。菌种袋堆叠过高，不仅难以透气，而且受热后的塑料袋相互挤压会粘连在一起，形成蒸汽无法穿透的“死角”。为了使锅内蒸汽充分流畅，菌种袋常采用顺码式堆放，每放4层，放置一层架隔开或直接放入周转筐中灭菌。
3）加足水量，旺火升温，高温足。在常压灭菌过程中，如果锅内很长时间达不到100℃，培养基的温度处于耐高温微生物的适温范围内，这些微生物就会在此时间内迅速增殖，严重的造成培养料酸败。因此，在常压灭菌中，用旺火攻头，使灭菌灶内温度在3h内达到100℃，是取得彻底灭菌效果的因素之一。
【提示】 蒸汽的热量首先被灶顶及四壁吸收，然后逐渐向中、下部传导，被料袋吸收。在一般火势下，要经过4～6h才能透入料袋中心，使袋中温度接近100℃。所以整个灭菌过程中要始终保持旺火加热，最好在4～6h内要上大气。其间注意补水，防止烧干锅，但不可加冷水，一次补水不宜过多，应少量多次加，一般每小时加水1次，不可停火。
4）灭菌时间达到后，停止加热，利用余热再封闭8～10h。待料温降至50～60℃时，趁热将其移入冷却室内冷却。
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【注意】 采用棉塞封口的要趁热在灭菌锅内烘干棉塞，待棉塞干后趁热出锅，不可强行开锅冷却，以免因迅速冷却使冷空气进入菌种袋内而污染杂菌。趁热出锅，放置在冷却室或接种室内，冷却至28℃左右接种。
（1）接种场所
1）接种车间。一般是在食用菌工厂化生产的接种室配备菇房空间电场空气净化与消毒机，配合超净工作台进行接种。
2）接种室。一般接种室的面积以6m2为宜，长3m、宽2m、高2～3m。室内墙壁及地面要平整、光滑，接种室门通常采用左右移动的拉门，以减少空气振动。接种室的窗户要采用双层玻璃窗内设黑色布帘，使得门窗关闭后能与外界空气隔绝，便于消毒。有条件的可安装空气过滤器。
【提示】 接种室应设在灭菌室和菌种培养室之间，以便培养基灭菌后可迅速移入接种室，接种后即可移入培养室，避免在长距离搬运过程中造成人力和时间的浪费，并招致污染。
3）塑料接种帐。用木条或铁丝做成框并用铁丝固定，再将薄膜焊成蚊帐状，然后罩在框架上，地面用木条压住薄膜，即可代替接种室使用。接种帐的容量大小，可根据生产需要而定。一般每次接种500～2000瓶（袋）。
4）接种箱。
（2）消毒灭菌 把菌种瓶（袋）、灭菌后的培养基及接种工具放入接种室，然后进行消毒。先用3%的煤酚皂液或5%石炭酸水溶液喷雾消毒或使用气雾消毒剂熏蒸消毒30min，使空气中微生物沉降，然后打开紫外线灯照射30min后接种。操作者进入接种室时，要穿工作服、鞋套、戴上帽子和口罩，操作前双手要用75%酒精棉球擦洗消毒，动作要轻缓，尽量减少空气流动。
（3）接种
1）原种接种。
①接种前准备。先准备好清洁无菌的接种室及待接种的母种菌种、原种培养基和接种工具等，接种人员要穿上工作服，在试管母种接入原种瓶时，瓶装培养基温度要降到28℃左右方可接种。
②点燃酒精灯，各种接种工具先经火焰灼烧灭菌。
③在酒精灯上方10cm无菌区轻轻拔下棉塞，立即将试管口倾斜，用酒精灯火焰封锁，防止杂菌侵入管内，用消毒过的接种钩伸入菌种试管，在试管壁上稍停留片刻使之冷却，以免烫死菌种，按无菌操作要求将试管斜面菌种横向切割6～8块。
④在酒精灯上方无菌区内，将待接菌瓶的封口打开，用接种钩取分割好的菌块，轻轻放入原种瓶内，立即封好口，一般每支母种可接5～6瓶原种。
2）栽培种接种。
①接种前检查原种棉塞和瓶口的菌膜上是否染有杂菌，发现污染杂菌的应弃之不用。
②打开原种封口，灼烧瓶口和接种工具，剥去原种表面的菌皮和老化菌种。
③如果双人接种，一人负责拿菌种瓶，用接种钩接种，另一人负责打开栽培种的瓶口或袋口。
④接种的菌种不可扒得太碎，最好呈蚕豆粒或核桃粒状，以利于发菌。
⑤接种后迅速封好瓶口。一瓶谷粒种接种不应超过50瓶（袋），木屑种、草料种不应超过35瓶（袋）。
⑥接种结束后应及时将台面、地面收拾干净，并用5%石炭酸水溶液喷雾消毒，关闭室门。
4.培养
（1）培养室消毒 接种后的菌瓶（袋）在进入培养室前，培养室要进行消毒灭菌。
（2）菌种培养 原种和栽培种在培养初期，要将温度控制在25～28℃之间。在培养中后期，将温度调低2～3℃，因为菌丝生长旺盛时，新陈代谢放出热量，瓶（袋）内温度要比室温高出2～3℃，如果温度过高会导致菌丝生长纤弱、老化。在菌种培养25～30天后，要采取降温措施，减缓菌丝的生长速度，从而使菌丝整齐、健壮。一般30～40天菌丝可吃透培养料，然后把温度稍微降低一些，缓冲培养7～10天，使菌种进一步成熟。
（3）污染检查 接种后7～10天内每隔2～3天要逐瓶检查一次，发现杂菌的应立即挑出，拿出培养室，妥善处理，以防引起大面积污染。
【提示】 如果在培养料深部出现杂菌菌落，说明灭菌不彻底；而在培养料表面出现杂菌，说明在接种过程中某一环节没有达到无菌操作要求。
