细菌形态学检查
细菌个体虽然微小，但用显微镜放大1 000倍左右，可清楚地看到外表形态；如果经超薄切片后用电子显微镜放大数万倍，还可观察到细菌内部的超微结构。
（一）光学显微镜检查
根据检查目的不同，可将细菌不经染色直接镜检或经染色后检查。
不染色标本镜检 可观察生活状态下细菌的形态及其运动情况。
1.悬滴法 主要用于观察细菌的动力。也可将菌液滴在中凹的载玻片上，加盖玻片压住（压滴法），置光学显微镜下观察。
2.暗视野显微镜检查法 用暗视野聚光器代替普通光显微镜的聚光器，光线由聚光器斜射到标本内的细菌菌体。用这种方法可检查细菌动力（如霍乱弧菌）及运动活泼的螺旋体（如钩端螺旋体）。
3.相差显微镜 弥补上两种镜检法之不足，利用光波透过标本内物体（细菌）的密度不同部位时，引起光相差异，使标本中的背景与细菌结构的对比较为明显。相差显微镜内相差板可将一部分光线滤去，只将通过细菌体的光波送入目镜，故能较清晰地看到标本内细菌的运动及细胞内某些结构。
（二）染色标本镜检
1.一般染色检查法 细菌的菌体在强光下呈透明或半透明，并有与玻璃片相似的折光系数，故在光学显微镜下较难看清楚。若将细菌制成涂片，固定后加以染色，便可在普通光学显微镜下清楚地看到细菌的形态。
细菌的染色是染料分子与细菌成分相结合的化学反应。细菌的等电点较低，在pH2～5之间，故在近于中性环境中，细菌多带阴电荷，易与带阳电荷的碱性染料结合而着色。因此，多用碱性苯胺染料如亚甲蓝、碱性复红、甲紫染色。
2.革兰染色法 染色法有多种，最常用最重要的分类鉴别染色法是革兰染色法（Gram stain）。该法是由丹麦细菌学家革兰于1883年发明的，是细菌学中最为经典的染色法。革兰染色的基本步骤包括：①标本固定后，先用结晶紫初染。②再加碘液媒染，使之生成结晶紫与碘的复合物。此时各种细菌均被染成深紫色。③然后用95%乙醇脱色。G－菌可被脱色，而G＋菌则仍为紫色。④最后用稀释复红或沙黄复染。此法可将细菌分成两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为G＋菌；被乙醇脱色后复染成红色者为G－菌（图1-11）。(https://www.daowen.com)
图1-11 革兰染色的基本步骤
革兰染色原理尚未确切了解。就目前所知，决定革兰染色结果的主要因素有：①G＋菌等电点（pH值为2～3）低于G－菌（pH值为4～5）。在同样条件下，G＋菌带负电荷多，与带正电荷的结晶紫染料结合牢固。②G＋菌细胞壁肽聚糖层数多，经乙醇脱水作用，肽聚糖网格状结构变得更致密，染料复合物不易从细胞内漏出。而G－菌细胞壁脂类含量多，肽聚糖少，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易漏出。两种因素中以后者更重要。革兰染色结果受多种因素（菌龄、染色和脱色时间、pH值等）影响。染色时只有严格按正规操作，才会得到准确结果。常见的革兰阳性菌和革兰阴性菌见表1-2。
表1-2 常见的革兰阳性菌和革兰阴性菌
革兰染色法的实际意义：①鉴别细菌。用革兰染色法可将所有细菌分成G＋与G－两大类，有助于进一步缩小鉴定细菌的范围。②选择治疗用药。G＋菌和G－菌对化学治疗药物和抗生素的敏感性不同。大多数G＋菌对青霉素、红霉素、头孢菌素、甲紫等敏感；大多数G－菌对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感。临床上可根据病原菌的革兰染色性选择有效的药物进行治疗。③与致病性有关。大多数G＋菌以外毒素致病；而G－菌则主要以内毒素作为其致病物质。二者致病机理和临床表现均不同。
3.荧光显微镜检查法 自然界中有许多物质能吸收波长较短的紫外光，而将其转换成波长较长的可见光线。这种物质叫作荧光物质。用特殊的荧光色素（如异硫氰酸荧光素、罗丹明等）将细菌染色后，置荧光显微镜下观察，可见到发出某种颜色荧光的细菌。荧光显微镜检查法还广泛地用于免疫学检查。
（三）电子显微镜检查
电子显微镜的光源是波长极短的电子波，在高度真空条件下，电子波长可短到0.005 nm左右，故其放大倍数极高，可达数十万倍，能分辨1 nm的物质。细菌的表面形态和内部超微结构均能清楚地显现。近年来还发展了扫描电镜，用电子流对物体表面进行扫描，可清楚地显露物体三维空间立体形象。电子显微镜必须在干燥真空的状态下检查，故不能观察生活的微生物。